CAJ | 학술논문

目的:从脐血中分离、培养血管内皮祖细胞,研究内皮祖细胞的生长特性和诱导分化条件. 方法: 应用MACS磁球抗体标记法纯化脐血中的CD133+细胞,通过流式细胞仪、免疫细胞化学、免疫荧光等技术及形态学(光镜、电镜)观察研究内皮祖细胞;将细胞接种于添加(或未添加)VEGF、bFGF、干细胞因子(SCF)的含20%胎牛血清(FBS)的IMDM培养基中,观察内皮祖细胞的生长特性. 结果: 分离新鲜脐血所得CD133阳性细胞占单个核细胞的(1.41±1.14)%,经流式细胞仪鉴定CD133+细胞纯度为75%-85%;将分离细胞接种于纤维连接蛋白包被的24孔板内,培养1-2 h即有细胞贴壁,7-10 d可见贴壁细胞呈铺路石样排列;14 d后细胞出现小圆形、梭形等多样性变化,可见毛细血管管腔样结构,电镜观察可见胞浆内典型的Weibel-Palade小体;在VEGF、bFGF、SCF存在条件下,检测贴壁细胞培养14 d后细胞表面抗原表达情况:与培养开始时相比,祖细胞标志CD133和CD34阳性率呈明显下降趋势,分别由(77.0±3.3)%和(93.1±4.7)%降至(1.6±2.2)%和(37.4±4.9)%,P<0.05,内皮细胞特异性标志Flk-1表达明显增加,由(22.3±3.3)%增至(94.3±4.1)%,P<0.05,同时vWF抗原呈强阳性表达,阳性率为(77.9±3.3)%. 结论: 根据细胞表面特异性分子标志(CD133+/CD34+/Flk-1+)可以从脐血中分离出EPCs,EPCs可在体外一定的诱导因子作用下,培养7-10 d分化为成熟内皮细胞.
목적:종제혈중분리、배양혈관내피조세포,연구내피조세포적생장특성화유도분화조건. 방법: 응용MACS자구항체표기법순화제혈중적CD133+세포,통과류식세포의、면역세포화학、면역형광등기술급형태학(광경、전경)관찰연구내피조세포;장세포접충우첨가(혹미첨가)VEGF、bFGF、간세포인자(SCF)적함20%태우혈청(FBS)적IMDM배양기중,관찰내피조세포적생장특성. 결과: 분리신선제혈소득CD133양성세포점단개핵세포적(1.41±1.14)%,경류식세포의감정CD133+세포순도위75%-85%;장분리세포접충우섬유련접단백포피적24공판내,배양1-2 h즉유세포첩벽,7-10 d가견첩벽세포정포로석양배렬;14 d후세포출현소원형、사형등다양성변화,가견모세혈관관강양결구,전경관찰가견포장내전형적Weibel-Palade소체;재VEGF、bFGF、SCF존재조건하,검측첩벽세포배양14 d후세포표면항원표체정황:여배양개시시상비,조세포표지CD133화CD34양성솔정명현하강추세,분별유(77.0±3.3)%화(93.1±4.7)%강지(1.6±2.2)%화(37.4±4.9)%,P<0.05,내피세포특이성표지Flk-1표체명현증가,유(22.3±3.3)%증지(94.3±4.1)%,P<0.05,동시vWF항원정강양성표체,양성솔위(77.9±3.3)%. 결론: 근거세포표면특이성분자표지(CD133+/CD34+/Flk-1+)가이종제혈중분리출EPCs,EPCs가재체외일정적유도인자작용하,배양7-10 d분화위성숙내피세포.