农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2006年
3期
319-322
,共4页
陈勇军%苏鑫铭%高晓飞%郑其升%于春梅%曹瑞兵%周斌%陈溥言
陳勇軍%囌鑫銘%高曉飛%鄭其升%于春梅%曹瑞兵%週斌%陳溥言
진용군%소흠명%고효비%정기승%우춘매%조서병%주빈%진부언
猪繁殖与呼吸综合症病毒%GP5蛋白%ORF5基因%原核表达
豬繁殖與呼吸綜閤癥病毒%GP5蛋白%ORF5基因%原覈錶達
저번식여호흡종합증병독%GP5단백%ORF5기인%원핵표체
根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5基因的核苷酸序列设计3对特异性引物,从重组质粒pMD-ORF5中扩增去除ORF5基因中包括全部信号肽在内的N端跨膜区(28 residues)和中部跨膜区(60 residues).改造后的ORF5基因分别命名为ORF5-1和ORF5-2.将2个基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-ORF5-1和pET-ORF5-2,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达和SDS-PAGE电泳分析,ORF5-1和ORF5-2基因获得融合表达,表达量分别为12.2%和39%,证明删除双跨膜区能明显提高ORF5基因的表达量.经Western blot分析,融合蛋白具有一定的免疫学活性,表明摘除跨膜区对该蛋白的抗原性影响不大.
根據GenBank公佈的豬繁殖與呼吸綜閤癥病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5基因的覈苷痠序列設計3對特異性引物,從重組質粒pMD-ORF5中擴增去除ORF5基因中包括全部信號肽在內的N耑跨膜區(28 residues)和中部跨膜區(60 residues).改造後的ORF5基因分彆命名為ORF5-1和ORF5-2.將2箇基因片段定嚮剋隆到原覈錶達載體pET-32a(+),構建重組質粒pET-ORF5-1和pET-ORF5-2,轉化大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受態細胞,經IPTG誘導錶達和SDS-PAGE電泳分析,ORF5-1和ORF5-2基因穫得融閤錶達,錶達量分彆為12.2%和39%,證明刪除雙跨膜區能明顯提高ORF5基因的錶達量.經Western blot分析,融閤蛋白具有一定的免疫學活性,錶明摘除跨膜區對該蛋白的抗原性影響不大.
근거GenBank공포적저번식여호흡종합증병독(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5기인적핵감산서렬설계3대특이성인물,종중조질립pMD-ORF5중확증거제ORF5기인중포괄전부신호태재내적N단과막구(28 residues)화중부과막구(60 residues).개조후적ORF5기인분별명명위ORF5-1화ORF5-2.장2개기인편단정향극륭도원핵표체재체pET-32a(+),구건중조질립pET-ORF5-1화pET-ORF5-2,전화대장간균(Escherichia coli)BL21(DE3)감수태세포,경IPTG유도표체화SDS-PAGE전영분석,ORF5-1화ORF5-2기인획득융합표체,표체량분별위12.2%화39%,증명산제쌍과막구능명현제고ORF5기인적표체량.경Western blot분석,융합단백구유일정적면역학활성,표명적제과막구대해단백적항원성영향불대.
