牛IFN-γ原核表达、单克隆抗体制备及其ELISA检测方法的建立
우IFN-γ원핵표체、단극륭항체제비급기ELISA검측방법적건립
Preparation of Monoclonal Antibodies Against Recombinant Bovine IFN-gamma and Development of Sandwich ELISA for Bovine IFN-gamma Detection
  • 万方数据
    生物工程学报 생물공정학보
    CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
    2007年 1期 40-45 ,共6页

    李川%谭亚娣%陈颖钰%胡巧云%马艳%张桂荣%钦博%晁彦杰%陈焕春%郭爱珍

    리천%담아제%진영옥%호교운%마염%장계영%흠박%조언걸%진환춘%곽애진

    牛IFN-γ%单克隆抗体%ELISA%克隆%表达 牛IFN-γ%單剋隆抗體%ELISA%剋隆%錶達
    우IFN-γ%단극륭항체%ELISA%극륭%표체
    实验旨在建立牛重组IFN-γ(BovIFN-γ)的ELISA检测技术,为牛传染病的免疫学诊断提供新方法.PHA刺激体外培养的奶牛外周血白细胞,从培养细胞中提取总RNA,经过RT-PCR扩增出BovIFN-γ基因cDNA,进一步克隆至pET28a,转化大肠杆菌,经IPTG诱导,表达出预期大小(18kD左右)组氨酸标记蛋白,经鉴定为BovIFN-γ;以纯化的重组BovIFN-y为免疫原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,获得4株能稳定分泌抗BovIFN-γ单克隆抗体的细胞株,分别命名为A7、A10、G6与G10.免疫球蛋白亚类鉴定证明杂交瘤细胞所分泌的抗体均为IgG1,腹水效价在1∶210×100～1∶211×100之间.Western-blot分析显示,4株单抗均能特异性结合重组BovIFN-γ.ELISA试验表明,4株单抗只与融合蛋白BovIFN-γ反应,而不与非相关性蛋白Ag85B、ESAT-6-CFP-10、GM-CSF等发生反应.选取A10细胞株分泌的单克隆抗体、纯化的多克隆抗体及辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG,建立了检测BovIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法.实验结果表明,此方法检测敏感性达到2ng/mL,特异性良好,为进一步建立灵敏、特异的病原感染诊断方法奠定了基础.
    실험지재건립우중조IFN-γ(BovIFN-γ)적ELISA검측기술,위우전염병적면역학진단제공신방법.PHA자격체외배양적내우외주혈백세포,종배양세포중제취총RNA,경과RT-PCR확증출BovIFN-γ기인cDNA,진일보극륭지pET28a,전화대장간균,경IPTG유도,표체출예기대소(18kD좌우)조안산표기단백,경감정위BovIFN-γ;이순화적중조BovIFN-y위면역원,응용림파세포잡교류기술,획득4주능은정분비항BovIFN-γ단극륭항체적세포주,분별명명위A7、A10、G6여G10.면역구단백아류감정증명잡교류세포소분비적항체균위IgG1,복수효개재1∶210×100～1∶211×100지간.Western-blot분석현시,4주단항균능특이성결합중조BovIFN-γ.ELISA시험표명,4주단항지여융합단백BovIFN-γ반응,이불여비상관성단백Ag85B、ESAT-6-CFP-10、GM-CSF등발생반응.선취A10세포주분비적단극륭항체、순화적다극륭항체급랄근과양화물매(HRP)표기적양항토IgG,건립료검측BovIFN-γ적쌍항체협심ELISA방법.실험결과표명,차방법검측민감성체도2ng/mL,특이성량호,위진일보건립령민、특이적병원감염진단방법전정료기출.
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