CAJ | 학술논문

目的:从广西眼镜蛇蛇毒中提取神经生长因子(nerve growth factor,NGF)并探讨其对人胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用.方法:①粗毒采用Sephadex G75 凝胶过滤及CM Sepharose CL-6B阳离子交换柱进行分离纯化,洗脱峰用大鼠嗜铬神经瘤细胞(PC12细胞)测定活性, 通过SDS-PAGE测定纯度和相对分子质量;②采用MTT法,以NGF浓度分别为7.5、15、30、60、120 mg/L处理人胃癌MGC-803细胞24 h,观察不同浓度NGF对MGC-803细胞的毒性和生长抑制率;③采用AO/EB双重染色法,NGF浓度分别为25、50、75 mg/L,观察不同浓度NGF作用后细胞染色及形态的变化,计算细胞凋亡率;④Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率变化.结果:①所得NGF为单一组分,SDS-PAGE结果为一条带,相对分子质量约为23 000,对PC12细胞有良好的促进分化作用;②NGF对MGC-803细胞的生长有抑制作用且呈剂量依赖关系,作用24 h的IC50值为49.9 mg/L;荧光显微镜下可观察到凋亡细胞主要特点为:细胞体积缩小,染色质固缩,橘红色荧光增强,各浓度组与对照组的细胞凋亡率比较有明显差异(P<0.01);流式细胞仪检测到早期细胞凋亡率随NGF浓度的增高而增加,各浓度组与对照组的细胞凋亡率比较有明显差异(P<0.01).结论:采用Sephadex G75 凝胶过滤及CM Sepharose CL-6B阳离子交换柱提取得到的眼镜蛇毒NGF能诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡且呈剂量依赖关系.
목적:종엄서안경사사독중제취신경생장인자(nerve growth factor,NGF)병탐토기대인위암MGC-803세포적생장억제작용.방법:①조독채용Sephadex G75 응효과려급CM Sepharose CL-6B양리자교환주진행분리순화,세탈봉용대서기락신경류세포(PC12세포)측정활성, 통과SDS-PAGE측정순도화상대분자질량;②채용MTT법,이NGF농도분별위7.5、15、30、60、120 mg/L처리인위암MGC-803세포24 h,관찰불동농도NGF대MGC-803세포적독성화생장억제솔;③채용AO/EB쌍중염색법,NGF농도분별위25、50、75 mg/L,관찰불동농도NGF작용후세포염색급형태적변화,계산세포조망솔;④Annexin V-FITC/PI쌍표기류식세포술검측세포조망솔변화.결과:①소득NGF위단일조분,SDS-PAGE결과위일조대,상대분자질량약위23 000,대PC12세포유량호적촉진분화작용;②NGF대MGC-803세포적생장유억제작용차정제량의뢰관계,작용24 h적IC50치위49.9 mg/L;형광현미경하가관찰도조망세포주요특점위:세포체적축소,염색질고축,귤홍색형광증강,각농도조여대조조적세포조망솔비교유명현차이(P<0.01);류식세포의검측도조기세포조망솔수NGF농도적증고이증가,각농도조여대조조적세포조망솔비교유명현차이(P<0.01).결론:채용Sephadex G75 응효과려급CM Sepharose CL-6B양리자교환주제취득도적안경사독NGF능유도인위암MGC-803세포조망차정제량의뢰관계.