浙江医学
浙江醫學
절강의학
ZHEJIANG MEDICAL JOURNAL
2010年
8期
1148-1150,1256
,共4页
细胞培养技术%乙型肝炎病毒%感染%HepG2.2.15细胞
細胞培養技術%乙型肝炎病毒%感染%HepG2.2.15細胞
세포배양기술%을형간염병독%감염%HepG2.2.15세포
目的探讨正常人肾小管上皮细胞(HKC)对乙型肝炎病毒(HBV)的易感性.方法 (1)体外培养的HKC传至6孔板中,接种密度为1×106个/ml,孵育24 h后分受感染和阴性对照两组.受感染组加入0.5ml HepG2.2.15细胞上清液(已知该体外培养的细胞系可随细胞传代释放HBV病毒颗粒);阴性对照组加入0.5ml 10%FCS-DMEM/F-12培养液.两组HKC继续孵育72h,消化、离心沉淀,PBS清洗,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测两组HKC中的HBV DNA.(2)将HKC细胞传代并接种至2个6孔板中盖玻片上制作细胞爬片,接种密度为1×106个/ml,24 h后行HBV感染实验.然后将两个6孔板分别作为:(1)受感染组:往六孔板中加入制备好的感染用HepG2.2.15细胞上清液2ml;(2)阴性对照组:往六孔板中加入2ml;10%FCS-DMEM/F-12培养液.将HepG2.2.15细胞分别传代并接种至6孔板中盖玻片上制作细胞爬片,接种密度为1×106个/ml,24h后作为阳性对照组:往六孔板中加入2 ml 10%FCS-DMEM培养液继续孵育72h,原位杂交检测各组中的HBV DNA.结果实时荧光定量聚合酶链反应检测到受感染组HKC的基因组中HBV DNA的存在,受感染组HKC原位杂交检测HBV DNA阳性,呈核型.结论体外培养的正常HKC对HBV易感.
目的探討正常人腎小管上皮細胞(HKC)對乙型肝炎病毒(HBV)的易感性.方法 (1)體外培養的HKC傳至6孔闆中,接種密度為1×106箇/ml,孵育24 h後分受感染和陰性對照兩組.受感染組加入0.5ml HepG2.2.15細胞上清液(已知該體外培養的細胞繫可隨細胞傳代釋放HBV病毒顆粒);陰性對照組加入0.5ml 10%FCS-DMEM/F-12培養液.兩組HKC繼續孵育72h,消化、離心沉澱,PBS清洗,實時熒光定量聚閤酶鏈反應(FQ-PCR)檢測兩組HKC中的HBV DNA.(2)將HKC細胞傳代併接種至2箇6孔闆中蓋玻片上製作細胞爬片,接種密度為1×106箇/ml,24 h後行HBV感染實驗.然後將兩箇6孔闆分彆作為:(1)受感染組:往六孔闆中加入製備好的感染用HepG2.2.15細胞上清液2ml;(2)陰性對照組:往六孔闆中加入2ml;10%FCS-DMEM/F-12培養液.將HepG2.2.15細胞分彆傳代併接種至6孔闆中蓋玻片上製作細胞爬片,接種密度為1×106箇/ml,24h後作為暘性對照組:往六孔闆中加入2 ml 10%FCS-DMEM培養液繼續孵育72h,原位雜交檢測各組中的HBV DNA.結果實時熒光定量聚閤酶鏈反應檢測到受感染組HKC的基因組中HBV DNA的存在,受感染組HKC原位雜交檢測HBV DNA暘性,呈覈型.結論體外培養的正常HKC對HBV易感.
목적탐토정상인신소관상피세포(HKC)대을형간염병독(HBV)적역감성.방법 (1)체외배양적HKC전지6공판중,접충밀도위1×106개/ml,부육24 h후분수감염화음성대조량조.수감염조가입0.5ml HepG2.2.15세포상청액(이지해체외배양적세포계가수세포전대석방HBV병독과립);음성대조조가입0.5ml 10%FCS-DMEM/F-12배양액.량조HKC계속부육72h,소화、리심침정,PBS청세,실시형광정량취합매련반응(FQ-PCR)검측량조HKC중적HBV DNA.(2)장HKC세포전대병접충지2개6공판중개파편상제작세포파편,접충밀도위1×106개/ml,24 h후행HBV감염실험.연후장량개6공판분별작위:(1)수감염조:왕륙공판중가입제비호적감염용HepG2.2.15세포상청액2ml;(2)음성대조조:왕륙공판중가입2ml;10%FCS-DMEM/F-12배양액.장HepG2.2.15세포분별전대병접충지6공판중개파편상제작세포파편,접충밀도위1×106개/ml,24h후작위양성대조조:왕륙공판중가입2 ml 10%FCS-DMEM배양액계속부육72h,원위잡교검측각조중적HBV DNA.결과실시형광정량취합매련반응검측도수감염조HKC적기인조중HBV DNA적존재,수감염조HKC원위잡교검측HBV DNA양성,정핵형.결론체외배양적정상HKC대HBV역감.
