中国神经免疫学和神经病学杂志
中國神經免疫學和神經病學雜誌
중국신경면역학화신경병학잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROIMMUNOLOGY AND
2011年
6期
425-427,443
,共4页
徐朝伟%李佳%付裕%周瑞瑞%张旭
徐朝偉%李佳%付裕%週瑞瑞%張旭
서조위%리가%부유%주서서%장욱
嗅鞘细胞%细胞培养技术%差速贴壁%胰酶限时消化
嗅鞘細胞%細胞培養技術%差速貼壁%胰酶限時消化
후초세포%세포배양기술%차속첩벽%이매한시소화
目的 探索出一套高效、实用的大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的培养和纯化方案.方法 分离SD大鼠嗅球的外两层组织,剪切消化成细胞悬液进行接种.采用3种方法进行OECs的培养和纯化:(1)A组分别经6h、24 h两次差速贴壁去除杂质细胞,培养至12d左右消化重悬细胞进行爬片分析.(2)B组分别经6h、24 h两次差速贴壁去除杂质细胞,培养至12d左右经胰酶限时消化,留成纤维细胞于瓶壁,重悬的细胞进行爬片分析.(3)C组采用经典的Nash法(分别经18 h、36 h两次差速贴壁去除杂质细胞),培养至11d左右消化重悬细胞进行爬片分析.采用NGFRP75与碘化丙啶(PI)双染的方法进行OECs的鉴定和纯度分析.结果 在共聚焦显微镜下呈双染阳性的细胞为OECs,OECs多数突起细长,呈双极或三极,少量呈单极或多极.A、B、C组所纯化的OECs纯度分别为(67.3±6.2)％、(83.7±7.7)％和(74.6士9.5)％,3组间比较有统计学差异(F=13.633,P＜0.01),B组所得OECs纯度均较另两组高(P＜0.05).结论 经6h、24 h两次差速贴壁十胰酶限时消化可以获得较高纯度的OECs,能够满足动物实验的需要.
目的 探索齣一套高效、實用的大鼠嗅毬嗅鞘細胞(OECs)的培養和純化方案.方法 分離SD大鼠嗅毬的外兩層組織,剪切消化成細胞懸液進行接種.採用3種方法進行OECs的培養和純化:(1)A組分彆經6h、24 h兩次差速貼壁去除雜質細胞,培養至12d左右消化重懸細胞進行爬片分析.(2)B組分彆經6h、24 h兩次差速貼壁去除雜質細胞,培養至12d左右經胰酶限時消化,留成纖維細胞于瓶壁,重懸的細胞進行爬片分析.(3)C組採用經典的Nash法(分彆經18 h、36 h兩次差速貼壁去除雜質細胞),培養至11d左右消化重懸細胞進行爬片分析.採用NGFRP75與碘化丙啶(PI)雙染的方法進行OECs的鑒定和純度分析.結果 在共聚焦顯微鏡下呈雙染暘性的細胞為OECs,OECs多數突起細長,呈雙極或三極,少量呈單極或多極.A、B、C組所純化的OECs純度分彆為(67.3±6.2)％、(83.7±7.7)％和(74.6士9.5)％,3組間比較有統計學差異(F=13.633,P＜0.01),B組所得OECs純度均較另兩組高(P＜0.05).結論 經6h、24 h兩次差速貼壁十胰酶限時消化可以穫得較高純度的OECs,能夠滿足動物實驗的需要.
목적 탐색출일투고효、실용적대서후구후초세포(OECs)적배양화순화방안.방법 분리SD대서후구적외량층조직,전절소화성세포현액진행접충.채용3충방법진행OECs적배양화순화:(1)A조분별경6h、24 h량차차속첩벽거제잡질세포,배양지12d좌우소화중현세포진행파편분석.(2)B조분별경6h、24 h량차차속첩벽거제잡질세포,배양지12d좌우경이매한시소화,류성섬유세포우병벽,중현적세포진행파편분석.(3)C조채용경전적Nash법(분별경18 h、36 h량차차속첩벽거제잡질세포),배양지11d좌우소화중현세포진행파편분석.채용NGFRP75여전화병정(PI)쌍염적방법진행OECs적감정화순도분석.결과 재공취초현미경하정쌍염양성적세포위OECs,OECs다수돌기세장,정쌍겁혹삼겁,소량정단겁혹다겁.A、B、C조소순화적OECs순도분별위(67.3±6.2)％、(83.7±7.7)％화(74.6사9.5)％,3조간비교유통계학차이(F=13.633,P＜0.01),B조소득OECs순도균교령량조고(P＜0.05).결론 경6h、24 h량차차속첩벽십이매한시소화가이획득교고순도적OECs,능구만족동물실험적수요.
