畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
8期
1071-1080
,共10页
赵贵民%杨文琳%吴苏君%云彦%雷安民
趙貴民%楊文琳%吳囌君%雲彥%雷安民
조귀민%양문림%오소군%운언%뢰안민
牛卵母细胞%p21基因%体外转录%显微注射
牛卵母細胞%p21基因%體外轉錄%顯微註射
우란모세포%p21기인%체외전록%현미주사
本研究旨在检测p21基因在牛卵成熟过程中的表达,并构建其真核表达载体.首先利用RT-PCR和免疫荧光染色对不同成熟阶段牛卵内p21的mRNA和蛋白表达进行检测.然后从牛成纤维细胞中克隆了p21基因并构建pVenus-P21真核表达载体.经脂质体2000介导重组质粒pVenus-P21转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察、RT-PCR检测,确认重组质粒在Hela细胞内的表达及定位.最后应用体外转录试剂盒将p21-venus体外转录为cRNA,并注射牛卵母细胞,荧光显微镜下观察其表达及定位.结果显示,在牛卵体外成熟过程中,各时期均存在p21基因mRNA及蛋白的表达.构建的真核表达载体pVenus-P21能够在Hela细胞中正确表达及定位.p21-ve-nus cRNA显微注射牛卵后其融合蛋白也能实现准确定位,为研究P21在卵母细胞成熟以及胚胎发育过程中的作用奠定了基础.
本研究旨在檢測p21基因在牛卵成熟過程中的錶達,併構建其真覈錶達載體.首先利用RT-PCR和免疫熒光染色對不同成熟階段牛卵內p21的mRNA和蛋白錶達進行檢測.然後從牛成纖維細胞中剋隆瞭p21基因併構建pVenus-P21真覈錶達載體.經脂質體2000介導重組質粒pVenus-P21轉染Hela細胞,通過熒光顯微鏡觀察、RT-PCR檢測,確認重組質粒在Hela細胞內的錶達及定位.最後應用體外轉錄試劑盒將p21-venus體外轉錄為cRNA,併註射牛卵母細胞,熒光顯微鏡下觀察其錶達及定位.結果顯示,在牛卵體外成熟過程中,各時期均存在p21基因mRNA及蛋白的錶達.構建的真覈錶達載體pVenus-P21能夠在Hela細胞中正確錶達及定位.p21-ve-nus cRNA顯微註射牛卵後其融閤蛋白也能實現準確定位,為研究P21在卵母細胞成熟以及胚胎髮育過程中的作用奠定瞭基礎.
본연구지재검측p21기인재우란성숙과정중적표체,병구건기진핵표체재체.수선이용RT-PCR화면역형광염색대불동성숙계단우란내p21적mRNA화단백표체진행검측.연후종우성섬유세포중극륭료p21기인병구건pVenus-P21진핵표체재체.경지질체2000개도중조질립pVenus-P21전염Hela세포,통과형광현미경관찰、RT-PCR검측,학인중조질립재Hela세포내적표체급정위.최후응용체외전록시제합장p21-venus체외전록위cRNA,병주사우란모세포,형광현미경하관찰기표체급정위.결과현시,재우란체외성숙과정중,각시기균존재p21기인mRNA급단백적표체.구건적진핵표체재체pVenus-P21능구재Hela세포중정학표체급정위.p21-ve-nus cRNA현미주사우란후기융합단백야능실현준학정위,위연구P21재란모세포성숙이급배태발육과정중적작용전정료기출.
