中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2001年
6期
786-789
,共4页
何凤田%陈宝军%乔太东%韩者艺%聂勇战%宋保华%樊代明
何鳳田%陳寶軍%喬太東%韓者藝%聶勇戰%宋保華%樊代明
하봉전%진보군%교태동%한자예%섭용전%송보화%번대명
结肠癌%单克隆抗体%抗独特型抗体%噬菌体呈现技术
結腸癌%單剋隆抗體%抗獨特型抗體%噬菌體呈現技術
결장암%단극륭항체%항독특형항체%서균체정현기술
以纯化的鼠抗人结肠癌细胞单克隆抗体(简称单抗)MC5与钥孔血蓝素(KLH)的交联物经腹腔免疫Balb/c小鼠,取脾分离mRNA.RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因片段(VH和VLcD-NA,大小分别约为340 bp和320 bp),二者经linker DNA连接形成ScFv(single chin variable fragment)DNA(约750 bp).将ScFv DNA与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv文库.以单抗MC5对ScFv文库进行4轮亲和筛选后,随机挑取80个克隆经酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选出22个呈现ScFv形式抗独特型抗体(抗-Id ScFv)的噬菌体单克隆.竞争抑制实验表明,在22个阳性克隆中有4个克隆所呈现的抗-[dScFv属β或γ型.针对单抗MC5的噬菌体呈现型抗-Id ScFv的制备,为筛选新的结肠癌重组抗-Id瘤苗候选分子奠定了基础.
以純化的鼠抗人結腸癌細胞單剋隆抗體(簡稱單抗)MC5與鑰孔血藍素(KLH)的交聯物經腹腔免疫Balb/c小鼠,取脾分離mRNA.RT-PCR分彆擴增抗體重、輕鏈可變區基因片段(VH和VLcD-NA,大小分彆約為340 bp和320 bp),二者經linker DNA連接形成ScFv(single chin variable fragment)DNA(約750 bp).將ScFv DNA與噬菌粒載體pCANTAB5E的連接產物轉化于大腸桿菌TG1,經輔助噬菌體M13K07感染後,穫得重組噬菌體抗體ScFv文庫.以單抗MC5對ScFv文庫進行4輪親和篩選後,隨機挑取80箇剋隆經酶聯免疫吸附實驗(ELISA)篩選齣22箇呈現ScFv形式抗獨特型抗體(抗-Id ScFv)的噬菌體單剋隆.競爭抑製實驗錶明,在22箇暘性剋隆中有4箇剋隆所呈現的抗-[dScFv屬β或γ型.針對單抗MC5的噬菌體呈現型抗-Id ScFv的製備,為篩選新的結腸癌重組抗-Id瘤苗候選分子奠定瞭基礎.
이순화적서항인결장암세포단극륭항체(간칭단항)MC5여약공혈람소(KLH)적교련물경복강면역Balb/c소서,취비분리mRNA.RT-PCR분별확증항체중、경련가변구기인편단(VH화VLcD-NA,대소분별약위340 bp화320 bp),이자경linker DNA련접형성ScFv(single chin variable fragment)DNA(약750 bp).장ScFv DNA여서균립재체pCANTAB5E적련접산물전화우대장간균TG1,경보조서균체M13K07감염후,획득중조서균체항체ScFv문고.이단항MC5대ScFv문고진행4륜친화사선후,수궤도취80개극륭경매련면역흡부실험(ELISA)사선출22개정현ScFv형식항독특형항체(항-Id ScFv)적서균체단극륭.경쟁억제실험표명,재22개양성극륭중유4개극륭소정현적항-[dScFv속β혹γ형.침대단항MC5적서균체정현형항-Id ScFv적제비,위사선신적결장암중조항-Id류묘후선분자전정료기출.
