中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
2003年
5期
446-453
,共8页
叶晨波%高啸波%侍鼎%陈立%邱信芳%薛京伦
葉晨波%高嘯波%侍鼎%陳立%邱信芳%薛京倫
협신파%고소파%시정%진립%구신방%설경륜
血友病B%人凝血因子Ⅸ%微小腺病毒%基因治疗%血友病B小鼠
血友病B%人凝血因子Ⅸ%微小腺病毒%基因治療%血友病B小鼠
혈우병B%인응혈인자Ⅸ%미소선병독%기인치료%혈우병B소서
为了降低腺病毒的免疫反应, 延长人凝血因子Ⅸ基因在动物体内的表达时间, 制备了带有人hFⅨ小基因的微小腺病毒AdGTi'Ⅸ, 同时制备了带有人hFⅨ小基因的第1代腺病毒AdSPi'Ⅸ作为对照. 经CsCl超离心纯化, AdGTi'Ⅸ中辅助腺病毒比率低于0.8%. 分别用AdSPi'Ⅸ和AdGTi'Ⅸ以MOI为50的比例感染3T3细胞, hFⅨ表达量分别为(1.6±0.3)μg /(106@24 h)和(1.4±0.2)μg /(106?24 h). 血友病B小鼠分别腹腔注射1(1010 pfu/只的AdGTi'Ⅸ和AdSPi'Ⅸ, 小鼠血浆中人FⅨ表达水平最高分别为590和690 ng/mL, 表达时间分别持续了16和10周. 与血友病B小鼠相比, 出血时间从原来的超过30 min缩短到7.5 min, 5 min内失血量从原来的430μL减少到60μL. 免疫组化和抗Ad-IgG分析的结果表明, 微小腺病毒AdGTi'Ⅸ与第1代重组腺病毒AdSPi'Ⅸ相比, 在宿主体内引起的免疫反应强度明显降低. 结果表明, 微小腺病毒与第1代腺病毒相比, 同样能够介导外源基因在离体细胞和动物体内高效表达, 而且在动物体内的表达时间上有所延长, 病毒引起的免疫反应强度则明显降低, 为进一步的研究提供了实验依据.
為瞭降低腺病毒的免疫反應, 延長人凝血因子Ⅸ基因在動物體內的錶達時間, 製備瞭帶有人hFⅨ小基因的微小腺病毒AdGTi'Ⅸ, 同時製備瞭帶有人hFⅨ小基因的第1代腺病毒AdSPi'Ⅸ作為對照. 經CsCl超離心純化, AdGTi'Ⅸ中輔助腺病毒比率低于0.8%. 分彆用AdSPi'Ⅸ和AdGTi'Ⅸ以MOI為50的比例感染3T3細胞, hFⅨ錶達量分彆為(1.6±0.3)μg /(106@24 h)和(1.4±0.2)μg /(106?24 h). 血友病B小鼠分彆腹腔註射1(1010 pfu/隻的AdGTi'Ⅸ和AdSPi'Ⅸ, 小鼠血漿中人FⅨ錶達水平最高分彆為590和690 ng/mL, 錶達時間分彆持續瞭16和10週. 與血友病B小鼠相比, 齣血時間從原來的超過30 min縮短到7.5 min, 5 min內失血量從原來的430μL減少到60μL. 免疫組化和抗Ad-IgG分析的結果錶明, 微小腺病毒AdGTi'Ⅸ與第1代重組腺病毒AdSPi'Ⅸ相比, 在宿主體內引起的免疫反應彊度明顯降低. 結果錶明, 微小腺病毒與第1代腺病毒相比, 同樣能夠介導外源基因在離體細胞和動物體內高效錶達, 而且在動物體內的錶達時間上有所延長, 病毒引起的免疫反應彊度則明顯降低, 為進一步的研究提供瞭實驗依據.
위료강저선병독적면역반응, 연장인응혈인자Ⅸ기인재동물체내적표체시간, 제비료대유인hFⅨ소기인적미소선병독AdGTi'Ⅸ, 동시제비료대유인hFⅨ소기인적제1대선병독AdSPi'Ⅸ작위대조. 경CsCl초리심순화, AdGTi'Ⅸ중보조선병독비솔저우0.8%. 분별용AdSPi'Ⅸ화AdGTi'Ⅸ이MOI위50적비례감염3T3세포, hFⅨ표체량분별위(1.6±0.3)μg /(106@24 h)화(1.4±0.2)μg /(106?24 h). 혈우병B소서분별복강주사1(1010 pfu/지적AdGTi'Ⅸ화AdSPi'Ⅸ, 소서혈장중인FⅨ표체수평최고분별위590화690 ng/mL, 표체시간분별지속료16화10주. 여혈우병B소서상비, 출혈시간종원래적초과30 min축단도7.5 min, 5 min내실혈량종원래적430μL감소도60μL. 면역조화화항Ad-IgG분석적결과표명, 미소선병독AdGTi'Ⅸ여제1대중조선병독AdSPi'Ⅸ상비, 재숙주체내인기적면역반응강도명현강저. 결과표명, 미소선병독여제1대선병독상비, 동양능구개도외원기인재리체세포화동물체내고효표체, 이차재동물체내적표체시간상유소연장, 병독인기적면역반응강도칙명현강저, 위진일보적연구제공료실험의거.
