第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2005年
12期
1204-1207
,共4页
ELC%融合表达%载体%缺失突变%Western blotting%蛋白纯化
ELC%融閤錶達%載體%缺失突變%Western blotting%蛋白純化
ELC%융합표체%재체%결실돌변%Western blotting%단백순화
目的克隆人趋化因子ELC基因,表达并初步纯化ELC融合蛋白.方法从扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增ELC成熟蛋白基因,并在5′和3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得ELC天然蛋白表达载体pET32a(+)/ELC,SDS-PAGE分析其表达,Western blot验证融合蛋白.大量表达并初步纯化ELC融合蛋白.结果成功克隆了ELC基因,表达并初步纯化得到ELC融合蛋白.结论构建的ELC硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式表达ELC硫氧还蛋白.
目的剋隆人趨化因子ELC基因,錶達併初步純化ELC融閤蛋白.方法從扁桃體中提取總RNA,再進行RT-PCR,擴增ELC成熟蛋白基因,併在5′和3′分彆添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位點,通過這兩箇酶切位點重組于pET32a(+)載體上,轉化E.coli DH5α,篩選暘性剋隆,酶切鑒定,DNA測序檢測插入序列的正確性,缺失突變穫得ELC天然蛋白錶達載體pET32a(+)/ELC,SDS-PAGE分析其錶達,Western blot驗證融閤蛋白.大量錶達併初步純化ELC融閤蛋白.結果成功剋隆瞭ELC基因,錶達併初步純化得到ELC融閤蛋白.結論構建的ELC硫氧還蛋白融閤錶達載體以可溶性蛋白的方式錶達ELC硫氧還蛋白.
목적극륭인추화인자ELC기인,표체병초보순화ELC융합단백.방법종편도체중제취총RNA,재진행RT-PCR,확증ELC성숙단백기인,병재5′화3′분별첨가NcoⅠ화EcoRⅠ매절위점,통과저량개매절위점중조우pET32a(+)재체상,전화E.coli DH5α,사선양성극륭,매절감정,DNA측서검측삽입서렬적정학성,결실돌변획득ELC천연단백표체재체pET32a(+)/ELC,SDS-PAGE분석기표체,Western blot험증융합단백.대량표체병초보순화ELC융합단백.결과성공극륭료ELC기인,표체병초보순화득도ELC융합단백.결론구건적ELC류양환단백융합표체재체이가용성단백적방식표체ELC류양환단백.
