中国临床康复
中國臨床康複
중국림상강복
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION
2006年
1期
31-33
,共3页
黄定强%杨大鉴%黎万荣%胥方元%欧小毅
黃定彊%楊大鑒%黎萬榮%胥方元%歐小毅
황정강%양대감%려만영%서방원%구소의
干细胞%骨髓%细胞分化
榦細胞%骨髓%細胞分化
간세포%골수%세포분화
目的:观察骨髓间充质干细胞在定向诱导分化条件下向成骨细胞、脂肪细胞分化的特征及相互关系.方法:实验于2004-10/2005-04在泸州医学院心肌电细胞实验室完成.日本大耳兔10只,经兔髂嵴无菌抽取骨髓,采用Percoll液进行梯度离心法和体外细胞贴壁分离培养法相结合对兔骨髓间充质干细胞进行分离、纯化,将获得的原代和传代培养的骨髓间充质干细胞,分别用含成脂诱导剂和含成骨诱导剂的改良的伊格尔培养基进行实验组(向脂肪细胞和成骨细胞的定向诱导培养,对诱导培养后的细胞进行生长形态学特征观察),对照组(采用不加成脂、成骨诱导剂的伊格尔培养基),两组进行成脂及成骨诱导后的苏丹脂肪染色、碱性磷酸酶活性检测、胞外矿化基质测定,并进行细胞成脂和成骨率比较.结果:从10只实验动物中均成功提取到骨髓间充质干细胞,其中有2只动物的骨髓间充质干细胞在原代培养时出现污染,8只获得成功进入结果分析. ①在经过21d成脂诱导培养后实验组的许多细胞胞浆内均出现较多的高折光性的脂滴,苏丹脂肪染色呈橘红色,同时Kossa法也检测出少许成骨分化,其比例为70%(28/40)干细胞可转化为含有脂滴的脂肪细胞;10%(4/40)干细胞转化为含有钙结节的成骨细胞. ②经过21 d向成骨诱导培养后实验组出现一些细胞基质逐渐堆积、并出现基质矿盐沉积,Von Kossa法测定形成的钙结节,同时苏丹脂肪染色也检测出少许向脂肪细胞分化,其比例为40%(16/40)干细胞可转化为成骨细胞,20%(8/40)骨髓间充质干细胞可转化为脂肪细胞. ③对照组用苏丹脂肪染色后显示5%(2/40)骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞,用Von Kossa法测定矿化结节形成比例和碱性磷酸酶活性测定结果成骨率10%(4/40).结论:在适当诱导条件下骨髓间充质干细胞可一部分转化为脂肪细胞,另一部分转化为成骨细胞,两者分化存在一定关系:分化的脂肪细胞多,则成骨细胞少;分化的成骨细胞多,则脂肪细胞少.
目的:觀察骨髓間充質榦細胞在定嚮誘導分化條件下嚮成骨細胞、脂肪細胞分化的特徵及相互關繫.方法:實驗于2004-10/2005-04在瀘州醫學院心肌電細胞實驗室完成.日本大耳兔10隻,經兔髂嵴無菌抽取骨髓,採用Percoll液進行梯度離心法和體外細胞貼壁分離培養法相結閤對兔骨髓間充質榦細胞進行分離、純化,將穫得的原代和傳代培養的骨髓間充質榦細胞,分彆用含成脂誘導劑和含成骨誘導劑的改良的伊格爾培養基進行實驗組(嚮脂肪細胞和成骨細胞的定嚮誘導培養,對誘導培養後的細胞進行生長形態學特徵觀察),對照組(採用不加成脂、成骨誘導劑的伊格爾培養基),兩組進行成脂及成骨誘導後的囌丹脂肪染色、堿性燐痠酶活性檢測、胞外礦化基質測定,併進行細胞成脂和成骨率比較.結果:從10隻實驗動物中均成功提取到骨髓間充質榦細胞,其中有2隻動物的骨髓間充質榦細胞在原代培養時齣現汙染,8隻穫得成功進入結果分析. ①在經過21d成脂誘導培養後實驗組的許多細胞胞漿內均齣現較多的高摺光性的脂滴,囌丹脂肪染色呈橘紅色,同時Kossa法也檢測齣少許成骨分化,其比例為70%(28/40)榦細胞可轉化為含有脂滴的脂肪細胞;10%(4/40)榦細胞轉化為含有鈣結節的成骨細胞. ②經過21 d嚮成骨誘導培養後實驗組齣現一些細胞基質逐漸堆積、併齣現基質礦鹽沉積,Von Kossa法測定形成的鈣結節,同時囌丹脂肪染色也檢測齣少許嚮脂肪細胞分化,其比例為40%(16/40)榦細胞可轉化為成骨細胞,20%(8/40)骨髓間充質榦細胞可轉化為脂肪細胞. ③對照組用囌丹脂肪染色後顯示5%(2/40)骨髓間充質榦細胞分化為脂肪細胞,用Von Kossa法測定礦化結節形成比例和堿性燐痠酶活性測定結果成骨率10%(4/40).結論:在適噹誘導條件下骨髓間充質榦細胞可一部分轉化為脂肪細胞,另一部分轉化為成骨細胞,兩者分化存在一定關繫:分化的脂肪細胞多,則成骨細胞少;分化的成骨細胞多,則脂肪細胞少.
목적:관찰골수간충질간세포재정향유도분화조건하향성골세포、지방세포분화적특정급상호관계.방법:실험우2004-10/2005-04재로주의학원심기전세포실험실완성.일본대이토10지,경토가척무균추취골수,채용Percoll액진행제도리심법화체외세포첩벽분리배양법상결합대토골수간충질간세포진행분리、순화,장획득적원대화전대배양적골수간충질간세포,분별용함성지유도제화함성골유도제적개량적이격이배양기진행실험조(향지방세포화성골세포적정향유도배양,대유도배양후적세포진행생장형태학특정관찰),대조조(채용불가성지、성골유도제적이격이배양기),량조진행성지급성골유도후적소단지방염색、감성린산매활성검측、포외광화기질측정,병진행세포성지화성골솔비교.결과:종10지실험동물중균성공제취도골수간충질간세포,기중유2지동물적골수간충질간세포재원대배양시출현오염,8지획득성공진입결과분석. ①재경과21d성지유도배양후실험조적허다세포포장내균출현교다적고절광성적지적,소단지방염색정귤홍색,동시Kossa법야검측출소허성골분화,기비례위70%(28/40)간세포가전화위함유지적적지방세포;10%(4/40)간세포전화위함유개결절적성골세포. ②경과21 d향성골유도배양후실험조출현일사세포기질축점퇴적、병출현기질광염침적,Von Kossa법측정형성적개결절,동시소단지방염색야검측출소허향지방세포분화,기비례위40%(16/40)간세포가전화위성골세포,20%(8/40)골수간충질간세포가전화위지방세포. ③대조조용소단지방염색후현시5%(2/40)골수간충질간세포분화위지방세포,용Von Kossa법측정광화결절형성비례화감성린산매활성측정결과성골솔10%(4/40).결론:재괄당유도조건하골수간충질간세포가일부분전화위지방세포,령일부분전화위성골세포,량자분화존재일정관계:분화적지방세포다,칙성골세포소;분화적성골세포다,칙지방세포소.
