CAJ | 학술논문

背景与目的:自噬作为Ⅱ型程序性死亡--自噬性死亡过程中的主要现象,与细胞的自噬性死亡有着密切的关系.研究者们对凋亡与细胞周期的关系进行了深入而细致的研究,但对自噬性细胞死亡与细胞周期的关系却知之甚少.本研究的目的是探讨不同方法诱导的细胞自噬与细胞周期之间的关系.方法:用Hanks'液替代培养基的饥饿诱导和用长春新碱诱导两种方法分别处理对数生长期的HeLa细胞、SW480细胞以及经过和未经过植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)刺激的健康人外周血淋巴细胞;应用激光共聚焦显微镜和透射电镜检测细胞自噬的发生,兔抗人微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1-LC3-Ⅱ)/DNA双参数流式细胞术分析自噬细胞的细胞周期.结果:HeLa细胞和SW480细胞用饥饿和长春新碱两种方法诱导的细胞自噬在G1、S、G2/M期均可以发生,且自噬发生率随诱导时间的延长逐渐增加.处于静止期(未经PHA刺激)的外周血淋巴细胞没有自噬的发生,48 h时LC3-Ⅱ表达率＜2.62%(Hanks'液饥饿诱导)或＜6.16%(长春新碱诱导);经PHA刺激48 h进入细胞周期的外周血淋巴细胞,2 h时已有明显的自噬发生.结论:MAP1-LC3-Ⅱ/DNA双参数流式细胞术是对细胞自噬与细胞周期进行同步分析的一种新的简便可靠的方法;细胞自噬只发生在细胞进入周期后,而静止期细胞对自噬诱导因素不敏感.
배경여목적:자서작위Ⅱ형정서성사망--자서성사망과정중적주요현상,여세포적자서성사망유착밀절적관계.연구자문대조망여세포주기적관계진행료심입이세치적연구,단대자서성세포사망여세포주기적관계각지지심소.본연구적목적시탐토불동방법유도적세포자서여세포주기지간적관계.방법:용Hanks'액체대배양기적기아유도화용장춘신감유도량충방법분별처리대수생장기적HeLa세포、SW480세포이급경과화미경과식물혈응소(phytohemagglutinin,PHA)자격적건강인외주혈림파세포;응용격광공취초현미경화투사전경검측세포자서적발생,토항인미관상관단백1경련3Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1-LC3-Ⅱ)/DNA쌍삼수류식세포술분석자서세포적세포주기.결과:HeLa세포화SW480세포용기아화장춘신감량충방법유도적세포자서재G1、S、G2/M기균가이발생,차자서발생솔수유도시간적연장축점증가.처우정지기(미경PHA자격)적외주혈림파세포몰유자서적발생,48 h시LC3-Ⅱ표체솔＜2.62%(Hanks'액기아유도)혹＜6.16%(장춘신감유도);경PHA자격48 h진입세포주기적외주혈림파세포,2 h시이유명현적자서발생.결론:MAP1-LC3-Ⅱ/DNA쌍삼수류식세포술시대세포자서여세포주기진행동보분석적일충신적간편가고적방법;세포자서지발생재세포진입주기후,이정지기세포대자서유도인소불민감.