CAJ | 학술논문

目的:提高脂质体介导的细胞转染效率.方法:在传统的脂质体生化转染过程中,介入了简单的物理转染技术,并应用有限稀释克隆技术和共聚焦荧光显微镜检测技术,对转染细胞进行了早期克隆筛选,用流式细胞术对转染细胞表达GFP的阳性率进行检测.结果:流式细胞术检测显示,通过改良法获得转染pcDNA3-GFP-PSA质粒的B16、RM1和EL4细胞,表达报告蛋白GFP的阳性百分率(26%、24%和40%)高于传统法转染的细胞(16%、16%和18%).改良法转染的B16、RM1和EL4经过克隆筛选、液氮冻存、水浴复苏和体外连续培养2周后,外源基因报告蛋白GFP表达的阳性百分率分别为77%、69%和83%.在转染流程上,通过改良法获得单克隆转染细胞株的时间明显缩短.结论:改良的脂质体转染方法结合细胞克隆技术,能在最短时间内获得高表达外源基因的转染细胞株.
목적:제고지질체개도적세포전염효솔.방법:재전통적지질체생화전염과정중,개입료간단적물리전염기술,병응용유한희석극륭기술화공취초형광현미경검측기술,대전염세포진행료조기극륭사선,용류식세포술대전염세포표체GFP적양성솔진행검측.결과:류식세포술검측현시,통과개량법획득전염pcDNA3-GFP-PSA질립적B16、RM1화EL4세포,표체보고단백GFP적양성백분솔(26%、24%화40%)고우전통법전염적세포(16%、16%화18%).개량법전염적B16、RM1화EL4경과극륭사선、액담동존、수욕복소화체외련속배양2주후,외원기인보고단백GFP표체적양성백분솔분별위77%、69%화83%.재전염류정상,통과개량법획득단극륭전염세포주적시간명현축단.결론:개량적지질체전염방법결합세포극륭기술,능재최단시간내획득고표체외원기인적전염세포주.