热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2008年
3期
205-208
,共4页
商涛%马文丽%黄吉城%张海燕%廖之君%陈霞%郑文岭
商濤%馬文麗%黃吉城%張海燕%廖之君%陳霞%鄭文嶺
상도%마문려%황길성%장해연%료지군%진하%정문령
克隆载体%亚克隆构建%长片段RT-PCR%西尼罗病毒
剋隆載體%亞剋隆構建%長片段RT-PCR%西尼囉病毒
극륭재체%아극륭구건%장편단RT-PCR%서니라병독
目的 构建西尼罗病毒基因组的cDNA亚克隆,为西尼罗病毒全长cDNA克隆的研发和应用打下基础.方法 根据基因组中限制性酶切位点的分布设计4对引物,QIAamp RNA抽提试剂盒提取西尼罗病毒培养细胞BHK-21的总RNA,长片段RT-PCR技术扩增目的 基因片段.将目的 基因片段与pMD18-T载体进行连接,转化入感受态细胞E.coli DH5α,进行蓝白斑筛选后得到阳性克隆,将重组质粒进行PCR和测序鉴定.结果 获得的目的 基因片段经PCR和测序结果表明西尼罗病毒功能基因正确地克隆进入载体.结论 成功获得西尼罗Ⅰ型病毒功能基因的cDNA亚克隆,可应用于西尼罗病毒全长cDNA克隆的制备.
目的 構建西尼囉病毒基因組的cDNA亞剋隆,為西尼囉病毒全長cDNA剋隆的研髮和應用打下基礎.方法 根據基因組中限製性酶切位點的分佈設計4對引物,QIAamp RNA抽提試劑盒提取西尼囉病毒培養細胞BHK-21的總RNA,長片段RT-PCR技術擴增目的 基因片段.將目的 基因片段與pMD18-T載體進行連接,轉化入感受態細胞E.coli DH5α,進行藍白斑篩選後得到暘性剋隆,將重組質粒進行PCR和測序鑒定.結果 穫得的目的 基因片段經PCR和測序結果錶明西尼囉病毒功能基因正確地剋隆進入載體.結論 成功穫得西尼囉Ⅰ型病毒功能基因的cDNA亞剋隆,可應用于西尼囉病毒全長cDNA剋隆的製備.
목적 구건서니라병독기인조적cDNA아극륭,위서니라병독전장cDNA극륭적연발화응용타하기출.방법 근거기인조중한제성매절위점적분포설계4대인물,QIAamp RNA추제시제합제취서니라병독배양세포BHK-21적총RNA,장편단RT-PCR기술확증목적 기인편단.장목적 기인편단여pMD18-T재체진행련접,전화입감수태세포E.coli DH5α,진행람백반사선후득도양성극륭,장중조질립진행PCR화측서감정.결과 획득적목적 기인편단경PCR화측서결과표명서니라병독공능기인정학지극륭진입재체.결론 성공획득서니라Ⅰ형병독공능기인적cDNA아극륭,가응용우서니라병독전장cDNA극륭적제비.
