中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2008年
4期
445-447,451
,共4页
王文龙%孙会卿%杨旭%贺兴鄂%雷建华%童明
王文龍%孫會卿%楊旭%賀興鄂%雷建華%童明
왕문룡%손회경%양욱%하흥악%뢰건화%동명
RNA干扰%短发夹RNA%乙型肝炎病毒%x基因%MHCC97-H细胞%整合
RNA榦擾%短髮夾RNA%乙型肝炎病毒%x基因%MHCC97-H細胞%整閤
RNA간우%단발협RNA%을형간염병독%x기인%MHCC97-H세포%정합
目的 构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBx gene)基因的shNA真核载体.方法 依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169,X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesiH载体;经酶切、PCR和测序鉴定;将鉴定的shRNA质粒脂质体转染MHCC97-H细胞,流式细胞分析转染效率.结果 酶切、PCR及测序证实pshRNA-X169/X220/MOCK质粒构建符合设计,转染48 h后MHCC97-H细胞可激发绿色荧光,pshRNA-X220转染效率最低.结论 成功构建靶向整合于人肝癌细胞HBVx基因特异性sRNA表达载体,并成功转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,为沉默HBx基因实验性肝癌基因治疗奠定基础.
目的 構建靶嚮整閤于人肝癌MHCC97-H細胞乙型肝炎病毒x基因(HBx gene)基因的shNA真覈載體.方法 依據從人肝癌細胞株MHCC97-H中剋隆的HBx基因序列,設計閤成X169,X220及MOCK(無關對照)3對寡覈痠,經退火成互補雙鏈併剋隆至pGenesiH載體;經酶切、PCR和測序鑒定;將鑒定的shRNA質粒脂質體轉染MHCC97-H細胞,流式細胞分析轉染效率.結果 酶切、PCR及測序證實pshRNA-X169/X220/MOCK質粒構建符閤設計,轉染48 h後MHCC97-H細胞可激髮綠色熒光,pshRNA-X220轉染效率最低.結論 成功構建靶嚮整閤于人肝癌細胞HBVx基因特異性sRNA錶達載體,併成功轉染人肝癌細胞株MHCC97-H細胞,為沉默HBx基因實驗性肝癌基因治療奠定基礎.
목적 구건파향정합우인간암MHCC97-H세포을형간염병독x기인(HBx gene)기인적shNA진핵재체.방법 의거종인간암세포주MHCC97-H중극륭적HBx기인서렬,설계합성X169,X220급MOCK(무관대조)3대과핵산,경퇴화성호보쌍련병극륭지pGenesiH재체;경매절、PCR화측서감정;장감정적shRNA질립지질체전염MHCC97-H세포,류식세포분석전염효솔.결과 매절、PCR급측서증실pshRNA-X169/X220/MOCK질립구건부합설계,전염48 h후MHCC97-H세포가격발록색형광,pshRNA-X220전염효솔최저.결론 성공구건파향정합우인간암세포HBVx기인특이성sRNA표체재체,병성공전염인간암세포주MHCC97-H세포,위침묵HBx기인실험성간암기인치료전정기출.
