CAJ | 학술논문

旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与dbat基因启动子顺式元件结合的转录因子.首先,分离dbat启动子上的顺式作用元件,并进行3个拷贝的重复后,和报告质粒pHis 2.1连接构建诱饵载体pHis 2.1-dp3.然后,从茉莉酸甲酯诱导的红豆杉细胞中提取总RNA,以纯化出的mRNA为模板,依次完成ss cDNA和ds cDNA的合成,并将纯化的ds cDNA、线性化载体pGADT7-Rec2和诱饵载体pHis 2.1-dp3共转化酵母细胞Y187,各取100 μl分别涂布于SD/-leu和SD/-leu/-trp平板,用于计算重组效率和转化效率,剩余转化液涂布于SD/-leu/-trp/-his/20 mM 3-AT平板,用于筛选阳性克隆.结果表明,重组效率为1.49×106 CFU/μg,共转化效率为1.93×105 CFU/μg;对阳性克隆质粒进行酶切、测序分析,得到6个可编码结合蛋白的基因.以上工作为筛选调控紫杉醇合成关键酶基因dbat表达的转录因子奠定了基础.
지재구건효모단잡교문고용우사선여dbat기인계동자순식원건결합적전록인자.수선,분리dbat계동자상적순식작용원건,병진행3개고패적중복후,화보고질립pHis 2.1련접구건유이재체pHis 2.1-dp3.연후,종말리산갑지유도적홍두삼세포중제취총RNA,이순화출적mRNA위모판,의차완성ss cDNA화ds cDNA적합성,병장순화적ds cDNA、선성화재체pGADT7-Rec2화유이재체pHis 2.1-dp3공전화효모세포Y187,각취100 μl분별도포우SD/-leu화SD/-leu/-trp평판,용우계산중조효솔화전화효솔,잉여전화액도포우SD/-leu/-trp/-his/20 mM 3-AT평판,용우사선양성극륭.결과표명,중조효솔위1.49×106 CFU/μg,공전화효솔위1.93×105 CFU/μg;대양성극륭질립진행매절、측서분석,득도6개가편마결합단백적기인.이상공작위사선조공자삼순합성관건매기인dbat표체적전록인자전정료기출.