南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
4期
587-593
,共7页
麦荣嘉%陈敏芳%莫倩珍%胡良勇%黎事伦%唐敏然%顾晓敏%蔡永洪%周伦彬%周晓红
麥榮嘉%陳敏芳%莫倩珍%鬍良勇%黎事倫%唐敏然%顧曉敏%蔡永洪%週倫彬%週曉紅
맥영가%진민방%막천진%호량용%려사륜%당민연%고효민%채영홍%주륜빈%주효홍
质粒标准分子%转基因番茄%核酸检测技术%荧光定量PCR
質粒標準分子%轉基因番茄%覈痠檢測技術%熒光定量PCR
질립표준분자%전기인번가%핵산검측기술%형광정량PCR
目的 构建转基因番茄Zeneca B,Da,F品系的质粒标准分子及其实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系.方法 基于反向遗传学原理构建分别含有番茄内标准基因apx检测序列(ERG-apx),转基因番茄B,Da,F品系pg基因的基因特异性序列(GS-pg)及其构建特异性序列(CS-16S、CS-16A)的番茄内参质粒标准分子pEasy-T3-APX,转基因番茄B,Da,F品系的构建特异性质粒标准分子pEasy-T3-16A、pEasy-T3-16S;以Beacon Designer7.5设计用于定性PCR和qPCR检测的引物对和Taqman探针;基于质粒标准分子建立了定性PCR和qPCR检测体系,对方法的特异性、敏感性、重复性、检测下限等指标进行评估;使用PicoGreen试剂盒对质粒标准分子进行定量,以质粒pEasy-T3-APX为背景DNA定量混有pEasy-T3-16A或pEasy-T3-16S制备成含量为1%和0.1%(w/w)的两组核酸标准物质,进行所构建qPCR检测体系的定量性能评价.结果 锚定qpCR检测靶序列:ERG-apx 108bp,GS-pg 108bp,CS-16S 109bp、CS-16A 102bp;酶切鉴定所构建的质粒标准分子均可得到预期大小,的插入子片段;所建立的实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系,重复性的相对标准差(RSD)0.2%～1.5%,检测下限25 copies,标准曲线方程线性关系R2值在0.994～0.998,效率在93.3%～102.4%.经换算系数Cf换算,对PicoGreen定量的样品进行验证,其实测值与真值的偏差是-9.7%～17.3%.结论 成功构建了转基因番茄ZenecaB,Da,F品系的质粒标准分子及其qPCR检测体系,为转基因番茄Zeneca B,Da,F品系转基因成分的监测建立了可行的可供使用的定性与定量检测体系.
目的 構建轉基因番茄Zeneca B,Da,F品繫的質粒標準分子及其實時熒光定量PCR(qPCR)檢測體繫.方法 基于反嚮遺傳學原理構建分彆含有番茄內標準基因apx檢測序列(ERG-apx),轉基因番茄B,Da,F品繫pg基因的基因特異性序列(GS-pg)及其構建特異性序列(CS-16S、CS-16A)的番茄內參質粒標準分子pEasy-T3-APX,轉基因番茄B,Da,F品繫的構建特異性質粒標準分子pEasy-T3-16A、pEasy-T3-16S;以Beacon Designer7.5設計用于定性PCR和qPCR檢測的引物對和Taqman探針;基于質粒標準分子建立瞭定性PCR和qPCR檢測體繫,對方法的特異性、敏感性、重複性、檢測下限等指標進行評估;使用PicoGreen試劑盒對質粒標準分子進行定量,以質粒pEasy-T3-APX為揹景DNA定量混有pEasy-T3-16A或pEasy-T3-16S製備成含量為1%和0.1%(w/w)的兩組覈痠標準物質,進行所構建qPCR檢測體繫的定量性能評價.結果 錨定qpCR檢測靶序列:ERG-apx 108bp,GS-pg 108bp,CS-16S 109bp、CS-16A 102bp;酶切鑒定所構建的質粒標準分子均可得到預期大小,的插入子片段;所建立的實時熒光定量PCR(qPCR)檢測體繫,重複性的相對標準差(RSD)0.2%～1.5%,檢測下限25 copies,標準麯線方程線性關繫R2值在0.994～0.998,效率在93.3%～102.4%.經換算繫數Cf換算,對PicoGreen定量的樣品進行驗證,其實測值與真值的偏差是-9.7%～17.3%.結論 成功構建瞭轉基因番茄ZenecaB,Da,F品繫的質粒標準分子及其qPCR檢測體繫,為轉基因番茄Zeneca B,Da,F品繫轉基因成分的鑑測建立瞭可行的可供使用的定性與定量檢測體繫.
목적 구건전기인번가Zeneca B,Da,F품계적질립표준분자급기실시형광정량PCR(qPCR)검측체계.방법 기우반향유전학원리구건분별함유번가내표준기인apx검측서렬(ERG-apx),전기인번가B,Da,F품계pg기인적기인특이성서렬(GS-pg)급기구건특이성서렬(CS-16S、CS-16A)적번가내삼질립표준분자pEasy-T3-APX,전기인번가B,Da,F품계적구건특이성질립표준분자pEasy-T3-16A、pEasy-T3-16S;이Beacon Designer7.5설계용우정성PCR화qPCR검측적인물대화Taqman탐침;기우질립표준분자건립료정성PCR화qPCR검측체계,대방법적특이성、민감성、중복성、검측하한등지표진행평고;사용PicoGreen시제합대질립표준분자진행정량,이질립pEasy-T3-APX위배경DNA정량혼유pEasy-T3-16A혹pEasy-T3-16S제비성함량위1%화0.1%(w/w)적량조핵산표준물질,진행소구건qPCR검측체계적정량성능평개.결과 묘정qpCR검측파서렬:ERG-apx 108bp,GS-pg 108bp,CS-16S 109bp、CS-16A 102bp;매절감정소구건적질립표준분자균가득도예기대소,적삽입자편단;소건립적실시형광정량PCR(qPCR)검측체계,중복성적상대표준차(RSD)0.2%～1.5%,검측하한25 copies,표준곡선방정선성관계R2치재0.994～0.998,효솔재93.3%～102.4%.경환산계수Cf환산,대PicoGreen정량적양품진행험증,기실측치여진치적편차시-9.7%～17.3%.결론 성공구건료전기인번가ZenecaB,Da,F품계적질립표준분자급기qPCR검측체계,위전기인번가Zeneca B,Da,F품계전기인성분적감측건립료가행적가공사용적정성여정량검측체계.
