细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
3期
280-282
,共3页
史曼%药立波%王立峰%李福洋%苏金%张健%李霞%刘新平
史曼%藥立波%王立峰%李福洋%囌金%張健%李霞%劉新平
사만%약립파%왕립봉%리복양%소금%장건%리하%류신평
CXCR1%可调控表达载体%类风湿性关节炎
CXCR1%可調控錶達載體%類風濕性關節炎
CXCR1%가조공표체재체%류풍습성관절염
目的:构建CXCR1-pTREhyg可调控性真核表达载体,检测其在NIH3T3细胞内的表达情况.方法:通过RTPCR的方法从原代培养的类风湿性关节炎患者滑膜成纤维细胞中克隆得到CXCR1的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTREhyg载体中.用脂质体将pTet-on质粒和CXCR1-pTREhyg共转染入NIH3T3细胞,以不同浓度的强力霉素诱导,用Western blot检测CXCR1蛋白表达水平.结果:Western blot显示,我们所构建的可调控性表达载体能在NIH3T3细胞内表达,不同浓度药物诱导的CXCR1表达水平明显不同;同时还观察到IL-8刺激后,NIH3T3细胞中Erk-1/2磷酸化水平升高.结论:成功构建了CXCR1-pTREhyg真核表达载体,并可在NIH3T3细胞内表达.经IL-8刺激的转染NIH3T3细胞中Erk-1/2活性发生变化.为进一步观察CXCR1与类风湿性关节炎损伤之间的关系奠定了基础.
目的:構建CXCR1-pTREhyg可調控性真覈錶達載體,檢測其在NIH3T3細胞內的錶達情況.方法:通過RTPCR的方法從原代培養的類風濕性關節炎患者滑膜成纖維細胞中剋隆得到CXCR1的全長基因,測序正確後將其亞剋隆入pTREhyg載體中.用脂質體將pTet-on質粒和CXCR1-pTREhyg共轉染入NIH3T3細胞,以不同濃度的彊力黴素誘導,用Western blot檢測CXCR1蛋白錶達水平.結果:Western blot顯示,我們所構建的可調控性錶達載體能在NIH3T3細胞內錶達,不同濃度藥物誘導的CXCR1錶達水平明顯不同;同時還觀察到IL-8刺激後,NIH3T3細胞中Erk-1/2燐痠化水平升高.結論:成功構建瞭CXCR1-pTREhyg真覈錶達載體,併可在NIH3T3細胞內錶達.經IL-8刺激的轉染NIH3T3細胞中Erk-1/2活性髮生變化.為進一步觀察CXCR1與類風濕性關節炎損傷之間的關繫奠定瞭基礎.
목적:구건CXCR1-pTREhyg가조공성진핵표체재체,검측기재NIH3T3세포내적표체정황.방법:통과RTPCR적방법종원대배양적류풍습성관절염환자활막성섬유세포중극륭득도CXCR1적전장기인,측서정학후장기아극륭입pTREhyg재체중.용지질체장pTet-on질립화CXCR1-pTREhyg공전염입NIH3T3세포,이불동농도적강력매소유도,용Western blot검측CXCR1단백표체수평.결과:Western blot현시,아문소구건적가조공성표체재체능재NIH3T3세포내표체,불동농도약물유도적CXCR1표체수평명현불동;동시환관찰도IL-8자격후,NIH3T3세포중Erk-1/2린산화수평승고.결론:성공구건료CXCR1-pTREhyg진핵표체재체,병가재NIH3T3세포내표체.경IL-8자격적전염NIH3T3세포중Erk-1/2활성발생변화.위진일보관찰CXCR1여류풍습성관절염손상지간적관계전정료기출.
