中草药
中草藥
중초약
CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
2007年
4期
588-591
,共4页
潘夕春%陈敏%张磊%廖志华%张明生
潘夕春%陳敏%張磊%廖誌華%張明生
반석춘%진민%장뢰%료지화%장명생
三分三%发根%共转化
三分三%髮根%共轉化
삼분삼%발근%공전화
目的 建立基于发根培养的三分三Anisodus acutangulus遗传转化体系及在三分三发根中表达外源基因的方法.方法 由种子直接萌发得到无菌苗,建立了三分三的无菌苗培养系统.将植物高效表达载体pCAMBIA1304+导入经过"disarmed"改造的根癌农杆菌C58C1(携带pRiA4质粒),获得了携带外源基因表达载体的重组C58C1工程菌.取生长良好的幼嫩真叶作为外植体,在乙酰丁香酮的诱导下用重组C58C1进行感染,诱导发根.选取在无激素培养基上生长迅速,分支多的发根单克隆进行继代培养.经过3次继代培养,PCR(polymerase chain reaction,聚合酶链式反应)检测用于验证发根型质粒pRiA4和表达型质粒pCAMBIA1304+是否整合到三分三发根基因组内.结果 建立了基于发根培养的三分三遗传转化体系,发根诱导频率达到100%,PCR检测表明pRiA4和pCAMBIA1304+质粒共转化率达到32%.结论 该方法可以用于在三分三发根中高效表达外源基因,为实现基于发根的三分三产托品烷类生物碱的代谢工程奠定了基础.
目的 建立基于髮根培養的三分三Anisodus acutangulus遺傳轉化體繫及在三分三髮根中錶達外源基因的方法.方法 由種子直接萌髮得到無菌苗,建立瞭三分三的無菌苗培養繫統.將植物高效錶達載體pCAMBIA1304+導入經過"disarmed"改造的根癌農桿菌C58C1(攜帶pRiA4質粒),穫得瞭攜帶外源基因錶達載體的重組C58C1工程菌.取生長良好的幼嫩真葉作為外植體,在乙酰丁香酮的誘導下用重組C58C1進行感染,誘導髮根.選取在無激素培養基上生長迅速,分支多的髮根單剋隆進行繼代培養.經過3次繼代培養,PCR(polymerase chain reaction,聚閤酶鏈式反應)檢測用于驗證髮根型質粒pRiA4和錶達型質粒pCAMBIA1304+是否整閤到三分三髮根基因組內.結果 建立瞭基于髮根培養的三分三遺傳轉化體繫,髮根誘導頻率達到100%,PCR檢測錶明pRiA4和pCAMBIA1304+質粒共轉化率達到32%.結論 該方法可以用于在三分三髮根中高效錶達外源基因,為實現基于髮根的三分三產託品烷類生物堿的代謝工程奠定瞭基礎.
목적 건립기우발근배양적삼분삼Anisodus acutangulus유전전화체계급재삼분삼발근중표체외원기인적방법.방법 유충자직접맹발득도무균묘,건립료삼분삼적무균묘배양계통.장식물고효표체재체pCAMBIA1304+도입경과"disarmed"개조적근암농간균C58C1(휴대pRiA4질립),획득료휴대외원기인표체재체적중조C58C1공정균.취생장량호적유눈진협작위외식체,재을선정향동적유도하용중조C58C1진행감염,유도발근.선취재무격소배양기상생장신속,분지다적발근단극륭진행계대배양.경과3차계대배양,PCR(polymerase chain reaction,취합매련식반응)검측용우험증발근형질립pRiA4화표체형질립pCAMBIA1304+시부정합도삼분삼발근기인조내.결과 건립료기우발근배양적삼분삼유전전화체계,발근유도빈솔체도100%,PCR검측표명pRiA4화pCAMBIA1304+질립공전화솔체도32%.결론 해방법가이용우재삼분삼발근중고효표체외원기인,위실현기우발근적삼분삼산탁품완류생물감적대사공정전정료기출.
