中国肿瘤生物治疗杂志
中國腫瘤生物治療雜誌
중국종류생물치료잡지
CHINESE JOURNAL OF CANCER BIOTHERAPY
2007年
3期
230-234
,共5页
曾贤铭%仲人前%周琳%杨再兴%梁艳%蒋廷旺%吴传勇
曾賢銘%仲人前%週琳%楊再興%樑豔%蔣廷旺%吳傳勇
증현명%중인전%주림%양재흥%량염%장정왕%오전용
B淋巴细胞活化因子%适体%单链DNA%指数富集的配体进化技术%进化
B淋巴細胞活化因子%適體%單鏈DNA%指數富集的配體進化技術%進化
B림파세포활화인자%괄체%단련DNA%지수부집적배체진화기술%진화
目的:进化筛选与B淋巴细胞活化因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)特异结合的单链DNA适体,鉴定其结合力.方法:应用指数方式富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术,将随机序列寡核苷酸文库与BAFF分子相互作用,分离出结合的寡核苷酸配体,经反复扩增、筛选数个循环,获得重组人BAFF的单链DNA适体,应用Dot blotting鉴定其结合力,酶联法比较各适体序列对BAFF的相对结合力.结果:优化实验条件后成功进行了13轮次筛选,随机选取42个阳性克隆测序,各序列GC含量最高达75%,分为6类不同序列;Dot blotting证实这些适体均与BAFF相结合;比较各适体序列结合BAFF的光密度值,以序列44光密度值最高(0.752,P《0.05),具有对BAFF相对最高结合力.结论:首次成功获得特异结合BAFF的高亲和力的单链DNA适体,为研发防治肿瘤和自身免疫疾病新药奠定了基础.
目的:進化篩選與B淋巴細胞活化因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)特異結閤的單鏈DNA適體,鑒定其結閤力.方法:應用指數方式富集的配體繫統進化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技術,將隨機序列寡覈苷痠文庫與BAFF分子相互作用,分離齣結閤的寡覈苷痠配體,經反複擴增、篩選數箇循環,穫得重組人BAFF的單鏈DNA適體,應用Dot blotting鑒定其結閤力,酶聯法比較各適體序列對BAFF的相對結閤力.結果:優化實驗條件後成功進行瞭13輪次篩選,隨機選取42箇暘性剋隆測序,各序列GC含量最高達75%,分為6類不同序列;Dot blotting證實這些適體均與BAFF相結閤;比較各適體序列結閤BAFF的光密度值,以序列44光密度值最高(0.752,P《0.05),具有對BAFF相對最高結閤力.結論:首次成功穫得特異結閤BAFF的高親和力的單鏈DNA適體,為研髮防治腫瘤和自身免疫疾病新藥奠定瞭基礎.
목적:진화사선여B림파세포활화인자(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)특이결합적단련DNA괄체,감정기결합력.방법:응용지수방식부집적배체계통진화(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)기술,장수궤서렬과핵감산문고여BAFF분자상호작용,분리출결합적과핵감산배체,경반복확증、사선수개순배,획득중조인BAFF적단련DNA괄체,응용Dot blotting감정기결합력,매련법비교각괄체서렬대BAFF적상대결합력.결과:우화실험조건후성공진행료13륜차사선,수궤선취42개양성극륭측서,각서렬GC함량최고체75%,분위6류불동서렬;Dot blotting증실저사괄체균여BAFF상결합;비교각괄체서렬결합BAFF적광밀도치,이서렬44광밀도치최고(0.752,P《0.05),구유대BAFF상대최고결합력.결론:수차성공획득특이결합BAFF적고친화력적단련DNA괄체,위연발방치종류화자신면역질병신약전정료기출.
