山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
8期
24-26
,共3页
白育庭%闵清%查文良%高卉%万敬枝
白育庭%閔清%查文良%高卉%萬敬枝
백육정%민청%사문량%고훼%만경지
VEGF165%基因克隆%表达%纯化%增殖
VEGF165%基因剋隆%錶達%純化%增殖
VEGF165%기인극륭%표체%순화%증식
目的 为血管内皮生长因子(VEGF165)生物学分子机制的研究奠定基础.方法 用RT-PCR法从人胎肝总RNA中逆转录扩增VEGF165,将其插入表达载体pET-32a(+) Vector中, 将测序鉴定正确的重组表达载体转化至E. Coli XL-Blue中表达,并用纯化蛋白刺激人脐静脉内皮细胞,检测其促增殖活性.结果 经异丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)诱导后,VEGF165(His)6得到有效表达, Western blot分析可以观察到相对分子质量为26 kD的诱导表达条带,该表达蛋白可与VEGF多克隆抗体发生特异性反应.用His-bind亲和层析纯化得到纯度较高的目的 蛋白,该蛋白可促进内皮细胞增殖.结论 基因工程技术可使大肠杆菌有效表达人VEGF165,并得到纯度较高、有增殖活性的VEGF165蛋白;此为进一步研究VEGF的生物学分子机制奠定了基础.
目的 為血管內皮生長因子(VEGF165)生物學分子機製的研究奠定基礎.方法 用RT-PCR法從人胎肝總RNA中逆轉錄擴增VEGF165,將其插入錶達載體pET-32a(+) Vector中, 將測序鑒定正確的重組錶達載體轉化至E. Coli XL-Blue中錶達,併用純化蛋白刺激人臍靜脈內皮細胞,檢測其促增殖活性.結果 經異丙基硫代-βD-半乳糖苷(IPTG)誘導後,VEGF165(His)6得到有效錶達, Western blot分析可以觀察到相對分子質量為26 kD的誘導錶達條帶,該錶達蛋白可與VEGF多剋隆抗體髮生特異性反應.用His-bind親和層析純化得到純度較高的目的 蛋白,該蛋白可促進內皮細胞增殖.結論 基因工程技術可使大腸桿菌有效錶達人VEGF165,併得到純度較高、有增殖活性的VEGF165蛋白;此為進一步研究VEGF的生物學分子機製奠定瞭基礎.
목적 위혈관내피생장인자(VEGF165)생물학분자궤제적연구전정기출.방법 용RT-PCR법종인태간총RNA중역전록확증VEGF165,장기삽입표체재체pET-32a(+) Vector중, 장측서감정정학적중조표체재체전화지E. Coli XL-Blue중표체,병용순화단백자격인제정맥내피세포,검측기촉증식활성.결과 경이병기류대-βD-반유당감(IPTG)유도후,VEGF165(His)6득도유효표체, Western blot분석가이관찰도상대분자질량위26 kD적유도표체조대,해표체단백가여VEGF다극륭항체발생특이성반응.용His-bind친화층석순화득도순도교고적목적 단백,해단백가촉진내피세포증식.결론 기인공정기술가사대장간균유효표체인VEGF165,병득도순도교고、유증식활성적VEGF165단백;차위진일보연구VEGF적생물학분자궤제전정료기출.
