微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2008年
3期
312-316
,共5页
曹轶梅%卢曾军%孙普%孙甲川%刘在新
曹軼梅%盧曾軍%孫普%孫甲川%劉在新
조질매%로증군%손보%손갑천%류재신
FMDV%3C蛋白酶基因%Sf9细胞%杆状病毒%表达
FMDV%3C蛋白酶基因%Sf9細胞%桿狀病毒%錶達
FMDV%3C단백매기인%Sf9세포%간상병독%표체
口蹄疫病毒3C蛋白酶在病毒的致病机理、聚蛋白前体的加工和RNA的复制上起着很重要的作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点.本研究从Asia Ⅰ型FMDV适应细胞毒中提取RNA,用RT-PCR技术扩增3C基因,首先克隆到pGEM-T载体,再亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBac B中,构建出重组转移载体pMel-3C.最后将含有目的基因的转移载体与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了重组杆状病毒.重组病毒经扩增后以10个MOI感染Sf9细胞,接种病毒72 h后收获细胞,样品经SDS-PAGE和Western blot证实3C蛋白获得表达,分子量约23kDa,与预测蛋白大小一致,且能被FMDV感染阳性血清所识别.本研究为空衣壳的体外组装及新型抗病毒药物设计的研究奠定了基础.
口蹄疫病毒3C蛋白酶在病毒的緻病機理、聚蛋白前體的加工和RNA的複製上起著很重要的作用,是噹前抗病毒研究的一箇重要靶點.本研究從Asia Ⅰ型FMDV適應細胞毒中提取RNA,用RT-PCR技術擴增3C基因,首先剋隆到pGEM-T載體,再亞剋隆到桿狀病毒轉移載體pMelBac B中,構建齣重組轉移載體pMel-3C.最後將含有目的基因的轉移載體與線性化的桿狀病毒DNA共轉染Sf9細胞,通過噬斑篩選和PCR鑒定,穫得瞭重組桿狀病毒.重組病毒經擴增後以10箇MOI感染Sf9細胞,接種病毒72 h後收穫細胞,樣品經SDS-PAGE和Western blot證實3C蛋白穫得錶達,分子量約23kDa,與預測蛋白大小一緻,且能被FMDV感染暘性血清所識彆.本研究為空衣殼的體外組裝及新型抗病毒藥物設計的研究奠定瞭基礎.
구제역병독3C단백매재병독적치병궤리、취단백전체적가공화RNA적복제상기착흔중요적작용,시당전항병독연구적일개중요파점.본연구종Asia Ⅰ형FMDV괄응세포독중제취RNA,용RT-PCR기술확증3C기인,수선극륭도pGEM-T재체,재아극륭도간상병독전이재체pMelBac B중,구건출중조전이재체pMel-3C.최후장함유목적기인적전이재체여선성화적간상병독DNA공전염Sf9세포,통과서반사선화PCR감정,획득료중조간상병독.중조병독경확증후이10개MOI감염Sf9세포,접충병독72 h후수획세포,양품경SDS-PAGE화Western blot증실3C단백획득표체,분자량약23kDa,여예측단백대소일치,차능피FMDV감염양성혈청소식별.본연구위공의각적체외조장급신형항병독약물설계적연구전정료기출.
