中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
2期
115-119,124
,共6页
邹亚学%孙莹%潘风光%郑梅竹%艾永兴%张玉静
鄒亞學%孫瑩%潘風光%鄭梅竹%艾永興%張玉靜
추아학%손형%반풍광%정매죽%애영흥%장옥정
小干扰RNA%鸡端粒酶反转录酶%荧光实时相对定量RT-PCR%MDCC-MSB1
小榦擾RNA%鷄耑粒酶反轉錄酶%熒光實時相對定量RT-PCR%MDCC-MSB1
소간우RNA%계단립매반전록매%형광실시상대정량RT-PCR%MDCC-MSB1
为通过体外转录的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)抑制马立克氏病淋巴瘤细胞(MDCC-MSB1)中鸡端粒酶反转录酶(Chicken telomerase reverse transcriptase,chTERT)mRNA的表达,探讨chTERT在MDCC-MSB1中的作用,本试验设计了针对chTERT mRNA的特异siRNA序列(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),利用T7 RNA聚合酶体外转录系统,制备21 bp的siRNA分子,通过脂质体介导转染MDCC-MSB1细胞,采用荧光实时相对定量RT-PCR方法检测转染细胞chTERT基因mRNA的相对表达量,流式细胞仪测定转染细胞周期变化情况.结果显示,siRNA-1和siRNA-3组在转染24 h后,有效地抑制了chTERT mRNA的表达,抑制率分别为68%和81%.细胞周期检测结果显示,与对照组相比,siRNA-1和siRNA-3转染组细胞在转染后24 h G0/G1期比例显著上升(P＜0.05),S期比例显著下降(P＜0.01),从而表明chTERT表达量的降低可有效抑制MDCC-MSB1细胞增殖.siRNA可有效抑制MDCC-MSB1细胞中chTERT基因的表达,而chTERT表达量的降低对MD-CC-MSB1细胞增殖具有明显的抑制作用.
為通過體外轉錄的小榦擾RNA(Small interference RNA,siRNA)抑製馬立剋氏病淋巴瘤細胞(MDCC-MSB1)中鷄耑粒酶反轉錄酶(Chicken telomerase reverse transcriptase,chTERT)mRNA的錶達,探討chTERT在MDCC-MSB1中的作用,本試驗設計瞭針對chTERT mRNA的特異siRNA序列(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),利用T7 RNA聚閤酶體外轉錄繫統,製備21 bp的siRNA分子,通過脂質體介導轉染MDCC-MSB1細胞,採用熒光實時相對定量RT-PCR方法檢測轉染細胞chTERT基因mRNA的相對錶達量,流式細胞儀測定轉染細胞週期變化情況.結果顯示,siRNA-1和siRNA-3組在轉染24 h後,有效地抑製瞭chTERT mRNA的錶達,抑製率分彆為68%和81%.細胞週期檢測結果顯示,與對照組相比,siRNA-1和siRNA-3轉染組細胞在轉染後24 h G0/G1期比例顯著上升(P＜0.05),S期比例顯著下降(P＜0.01),從而錶明chTERT錶達量的降低可有效抑製MDCC-MSB1細胞增殖.siRNA可有效抑製MDCC-MSB1細胞中chTERT基因的錶達,而chTERT錶達量的降低對MD-CC-MSB1細胞增殖具有明顯的抑製作用.
위통과체외전록적소간우RNA(Small interference RNA,siRNA)억제마립극씨병림파류세포(MDCC-MSB1)중계단립매반전록매(Chicken telomerase reverse transcriptase,chTERT)mRNA적표체,탐토chTERT재MDCC-MSB1중적작용,본시험설계료침대chTERT mRNA적특이siRNA서렬(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),이용T7 RNA취합매체외전록계통,제비21 bp적siRNA분자,통과지질체개도전염MDCC-MSB1세포,채용형광실시상대정량RT-PCR방법검측전염세포chTERT기인mRNA적상대표체량,류식세포의측정전염세포주기변화정황.결과현시,siRNA-1화siRNA-3조재전염24 h후,유효지억제료chTERT mRNA적표체,억제솔분별위68%화81%.세포주기검측결과현시,여대조조상비,siRNA-1화siRNA-3전염조세포재전염후24 h G0/G1기비례현저상승(P＜0.05),S기비례현저하강(P＜0.01),종이표명chTERT표체량적강저가유효억제MDCC-MSB1세포증식.siRNA가유효억제MDCC-MSB1세포중chTERT기인적표체,이chTERT표체량적강저대MD-CC-MSB1세포증식구유명현적억제작용.
