浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2010年
5期
477-482
,共6页
胡艳%舒力琪%陈齐兴%姚航平
鬍豔%舒力琪%陳齊興%姚航平
호염%서력기%진제흥%요항평
受体,免疫/生物合成%膜糖蛋白类/遗传学%重组,遗传%真核表达%髓系细胞触发受体-1
受體,免疫/生物閤成%膜糖蛋白類/遺傳學%重組,遺傳%真覈錶達%髓繫細胞觸髮受體-1
수체,면역/생물합성%막당단백류/유전학%중조,유전%진핵표체%수계세포촉발수체-1
目的:构建髓系细胞触发受体-1(TREM-1)的真核表达质粒.方法:利用RT-PCR从人外周血总RNA中扩增TREM-1 基因的全长cDNA,插入克隆载体pUCm-T,BamH I和Pst I,酶切后将目的片段插入真核表达载体pEGFP-C3,构建含有TREM-1的重组质粒pEGFP-TREM-1,转染293细胞,用荧光显微镜观察、Western-blot鉴定蛋白表达.将pEGFP-TREM-1重组质粒转染THP-1细胞,100 ng/ml LPS刺激24 h后,半定量RT-PCR检测TNF-α和IL-1β基因的 mRNA水平.结果:经酶切和基因测序证实,克隆的基因片段为TREM-1基因;经转染的293细胞在荧光显微镜下可见荧光,并能表达TREM-1蛋白;重组TREM-1蛋白具有生物学活性,能增强TNF-α和IL-1β基因的mRNA水平.结论:成功构建了能够表达TREM-1的真核表达质粒pEGFP-C3-TREM-1,为进一步研究该基因的功能奠定了实验基础.
目的:構建髓繫細胞觸髮受體-1(TREM-1)的真覈錶達質粒.方法:利用RT-PCR從人外週血總RNA中擴增TREM-1 基因的全長cDNA,插入剋隆載體pUCm-T,BamH I和Pst I,酶切後將目的片段插入真覈錶達載體pEGFP-C3,構建含有TREM-1的重組質粒pEGFP-TREM-1,轉染293細胞,用熒光顯微鏡觀察、Western-blot鑒定蛋白錶達.將pEGFP-TREM-1重組質粒轉染THP-1細胞,100 ng/ml LPS刺激24 h後,半定量RT-PCR檢測TNF-α和IL-1β基因的 mRNA水平.結果:經酶切和基因測序證實,剋隆的基因片段為TREM-1基因;經轉染的293細胞在熒光顯微鏡下可見熒光,併能錶達TREM-1蛋白;重組TREM-1蛋白具有生物學活性,能增彊TNF-α和IL-1β基因的mRNA水平.結論:成功構建瞭能夠錶達TREM-1的真覈錶達質粒pEGFP-C3-TREM-1,為進一步研究該基因的功能奠定瞭實驗基礎.
목적:구건수계세포촉발수체-1(TREM-1)적진핵표체질립.방법:이용RT-PCR종인외주혈총RNA중확증TREM-1 기인적전장cDNA,삽입극륭재체pUCm-T,BamH I화Pst I,매절후장목적편단삽입진핵표체재체pEGFP-C3,구건함유TREM-1적중조질립pEGFP-TREM-1,전염293세포,용형광현미경관찰、Western-blot감정단백표체.장pEGFP-TREM-1중조질립전염THP-1세포,100 ng/ml LPS자격24 h후,반정량RT-PCR검측TNF-α화IL-1β기인적 mRNA수평.결과:경매절화기인측서증실,극륭적기인편단위TREM-1기인;경전염적293세포재형광현미경하가견형광,병능표체TREM-1단백;중조TREM-1단백구유생물학활성,능증강TNF-α화IL-1β기인적mRNA수평.결론:성공구건료능구표체TREM-1적진핵표체질립pEGFP-C3-TREM-1,위진일보연구해기인적공능전정료실험기출.
