实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2012年
7期
531-533
,共3页
叶娟%王群%付溪%郑锐丹%应艳琴%罗小平
葉娟%王群%付溪%鄭銳丹%應豔琴%囉小平
협연%왕군%부계%정예단%응염금%라소평
肝细胞%原代细胞培养%灌注法%鉴定%大鼠
肝細胞%原代細胞培養%灌註法%鑒定%大鼠
간세포%원대세포배양%관주법%감정%대서
目的 探讨原代大鼠肝细胞分离及培养的简易方法,并对其纯度及生物活性进行鉴定.方法 采用改良原位两步非循环灌流法及多次过滤低速离心法分离原代大鼠肝细胞,常规DMEM高糖培养基培养原代大鼠肝细胞,锥虫蓝拒染法检测接种时肝细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝细胞形态变化.过碘酸-Schiff反应检测肝细胞糖原合成能力,并利用免疫细胞化学方法检测肝细胞角蛋白18(CK-18)的表达联合判断肝细胞纯度.结果 每只大鼠可获取(1.38～1.74)×108个肝细胞,接种瞬时肝细胞活性＞90％.倒置显微镜下观察肝细胞在接种后4h基本完成贴壁,贴壁的细胞胞体变大变平,随后细胞相互靠拢呈岛状或条索状连接.糖原染色发现肝细胞内糖原被染成红色颗粒或片状.抗CK-18免疫细胞化学染色发现CK-18在肝细胞内均匀分布,被染成棕黄色.糖原染色及细胞CK-18联合鉴定肝细胞纯度达95％以上.结论 用改良原位两步非循环灌注法及多次过滤低速离心法成功分离并培养原代大鼠肝细胞,可操作性强,所培养肝细胞数量、活力和纯度高,可在具备基本细胞培养条件的实验室推广.
目的 探討原代大鼠肝細胞分離及培養的簡易方法,併對其純度及生物活性進行鑒定.方法 採用改良原位兩步非循環灌流法及多次過濾低速離心法分離原代大鼠肝細胞,常規DMEM高糖培養基培養原代大鼠肝細胞,錐蟲藍拒染法檢測接種時肝細胞的存活率,倒置顯微鏡動態觀察肝細胞形態變化.過碘痠-Schiff反應檢測肝細胞糖原閤成能力,併利用免疫細胞化學方法檢測肝細胞角蛋白18(CK-18)的錶達聯閤判斷肝細胞純度.結果 每隻大鼠可穫取(1.38～1.74)×108箇肝細胞,接種瞬時肝細胞活性＞90％.倒置顯微鏡下觀察肝細胞在接種後4h基本完成貼壁,貼壁的細胞胞體變大變平,隨後細胞相互靠攏呈島狀或條索狀連接.糖原染色髮現肝細胞內糖原被染成紅色顆粒或片狀.抗CK-18免疫細胞化學染色髮現CK-18在肝細胞內均勻分佈,被染成棕黃色.糖原染色及細胞CK-18聯閤鑒定肝細胞純度達95％以上.結論 用改良原位兩步非循環灌註法及多次過濾低速離心法成功分離併培養原代大鼠肝細胞,可操作性彊,所培養肝細胞數量、活力和純度高,可在具備基本細胞培養條件的實驗室推廣.
목적 탐토원대대서간세포분리급배양적간역방법,병대기순도급생물활성진행감정.방법 채용개량원위량보비순배관류법급다차과려저속리심법분리원대대서간세포,상규DMEM고당배양기배양원대대서간세포,추충람거염법검측접충시간세포적존활솔,도치현미경동태관찰간세포형태변화.과전산-Schiff반응검측간세포당원합성능력,병이용면역세포화학방법검측간세포각단백18(CK-18)적표체연합판단간세포순도.결과 매지대서가획취(1.38～1.74)×108개간세포,접충순시간세포활성＞90％.도치현미경하관찰간세포재접충후4h기본완성첩벽,첩벽적세포포체변대변평,수후세포상호고롱정도상혹조색상련접.당원염색발현간세포내당원피염성홍색과립혹편상.항CK-18면역세포화학염색발현CK-18재간세포내균균분포,피염성종황색.당원염색급세포CK-18연합감정간세포순도체95％이상.결론 용개량원위량보비순배관주법급다차과려저속리심법성공분리병배양원대대서간세포,가조작성강,소배양간세포수량、활력화순도고,가재구비기본세포배양조건적실험실추엄.
