CAJ | 학술논문

目的研究抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)在肾间质纤维化发生中的作用.方法 (1)检测48例原发性肾小球肾炎患儿肾组织中PHB蛋白表达,并比较其与肾小管间质损伤程度的相关性.(2)观察PHB在大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F)中亚细胞定位,以Western印迹和RT-PCR测定NRK-49F受到转化生长因子β1(TGF-β1)刺激后PHB表达的变化.(3)构建PHB表达质粒并转染,观察PHB对NRK-49F细胞周期以及表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白质和mRNA的影响.结果 (1)PHB蛋白主要表达于肾间质细胞和肾小管上皮细胞的胞质,随肾小管间质损伤程度加重而逐渐减弱(组间比较,均P＜0.01),PHB表达量与肾小管间质损伤程度显著负相关(r=-0.802,P＜0.01).(2)激光共焦显微镜下见PHB主要分布于NRK-49F的细胞质,细胞核亦有较弱表达.TGF-β1刺激后PHB蛋白和mRNA表达均下调,呈现时间和剂量依赖关系(组间比较,P＜0.01).(3)成功构建PHB真核表达质粒,转染48h细胞中PHB蛋白量升高约2.54倍(与未转染组比较,P＜0.01).(4)转染PHB基因明显抑制TGF-β1所诱导的细胞增殖,使更多的细胞处于G0/G1期(与TGF-β1组比较,P＜0.01),而对未受刺激的细胞无影响(P＞0.05).(5)转染PHB基因明显抑制TGF-β1所诱导的α-SMA蛋白质和mRNA表达(与TGF-β1组比较,P＜0.01),而对α-SMA基础表达无影响(与TGF-β1组比较,P＞0.05).结论 PHB在肾组织中的表达水平可以反映肾小管间质损伤程度,外源性PHB显著抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖和表型改变.
목적 연구항증식단백(prohibitin,PHB)재신간질섬유화발생중적작용.방법 (1)검측48례원발성신소구신염환인신조직중PHB단백표체,병비교기여신소관간질손상정도적상관성.(2)관찰PHB재대서신장성섬유세포(NRK-49F)중아세포정위,이Western인적화RT-PCR측정NRK-49F수도전화생장인자β1(TGF-β1)자격후PHB표체적변화.(3)구건PHB표체질립병전염,관찰PHB대NRK-49F세포주기이급표체α-평활기기동단백(α-SMA)단백질화mRNA적영향.결과 (1)PHB단백주요표체우신간질세포화신소관상피세포적포질,수신소관간질손상정도가중이축점감약(조간비교,균P＜0.01),PHB표체량여신소관간질손상정도현저부상관(r=-0.802,P＜0.01).(2)격광공초현미경하견PHB주요분포우NRK-49F적세포질,세포핵역유교약표체.TGF-β1자격후PHB단백화mRNA표체균하조,정현시간화제량의뢰관계(조간비교,P＜0.01).(3)성공구건PHB진핵표체질립,전염48h세포중PHB단백량승고약2.54배(여미전염조비교,P＜0.01).(4)전염PHB기인명현억제TGF-β1소유도적세포증식,사경다적세포처우G0/G1기(여TGF-β1조비교,P＜0.01),이대미수자격적세포무영향(P＞0.05).(5)전염PHB기인명현억제TGF-β1소유도적α-SMA단백질화mRNA표체(여TGF-β1조비교,P＜0.01),이대α-SMA기출표체무영향(여TGF-β1조비교,P＞0.05).결론 PHB재신조직중적표체수평가이반영신소관간질손상정도,외원성PHB현저억제TGF-β1유도적성섬유세포증식화표형개변.