CAJ | 학술논문

为了解融合蛋白F1分子的胞外非保守区在融合蛋白(F)与血凝素-神经氨酸酶(HN)的特异性膜融合中的作用,采用基因定点突变方法,在新城疫病毒(NDV)F1与人副流感病毒(hPIV)F1基因的胞外非保守区进行定点突变,创造酶切位点,得到分别含3个相同酶切位点的突变株NDV-M和hPIV-M.经检测,突变体的细胞融合功能与野毒株相同.然后用3个限制性内切酶分别从NDV-M与hPIV-M中切出两个片段NDV F-1、F-2及hPIV F-1、F-2.NDV-M和hPIV-M相互交换对应的F-1片段后进行基因重组,得到2个嵌合体(Chimera),即NDV-C1和hPIV-C1;同样方法交换F-2片段后又得到2个嵌合体NDV-C2和hPIV-C2.将各种嵌合体DNA与同源及异源HN基因共转染BHK21细胞后,在真核细胞中表达.Giemsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测F蛋白的表达效率.结果表明,突变体NDV-M和hPIV-M的细胞融合功能与野毒株相同,可用于构建嵌合体.NDV-C1和NDV-C2分别与NDV HN共表达后,融合功能达到野毒株的76.34%和96.2%,与hPIVHN共表达后均无细胞融合发生;hPIV-C1和hPIV-C2分别与hPIV HN共表达后,融合功能达到野毒株的65.82%和93.78%,与NDV HN共表达后无细胞融合发生.FACS分析表明,突变体及所有嵌合体蛋白F的表达效率与野毒株相比均没有明显变化.实验结果说明在F1蛋白的胞外非保守区中,NDV F-1和hPIV F-1这两个片段对于NDV和hPIV的特异性膜融合具有重要作用;而NDV F-2和hPIV F-2这两个片段对于NDV和hPIV的膜融合来讲,则特异性较低.
위료해융합단백F1분자적포외비보수구재융합단백(F)여혈응소-신경안산매(HN)적특이성막융합중적작용,채용기인정점돌변방법,재신성역병독(NDV)F1여인부류감병독(hPIV)F1기인적포외비보수구진행정점돌변,창조매절위점,득도분별함3개상동매절위점적돌변주NDV-M화hPIV-M.경검측,돌변체적세포융합공능여야독주상동.연후용3개한제성내절매분별종NDV-M여hPIV-M중절출량개편단NDV F-1、F-2급hPIV F-1、F-2.NDV-M화hPIV-M상호교환대응적F-1편단후진행기인중조,득도2개감합체(Chimera),즉NDV-C1화hPIV-C1;동양방법교환F-2편단후우득도2개감합체NDV-C2화hPIV-C2.장각충감합체DNA여동원급이원HN기인공전염BHK21세포후,재진핵세포중표체.Giemsa염색화지시기인법검측세포융합공능,형광강도분석(FACS)검측F단백적표체효솔.결과표명,돌변체NDV-M화hPIV-M적세포융합공능여야독주상동,가용우구건감합체.NDV-C1화NDV-C2분별여NDV HN공표체후,융합공능체도야독주적76.34%화96.2%,여hPIVHN공표체후균무세포융합발생;hPIV-C1화hPIV-C2분별여hPIV HN공표체후,융합공능체도야독주적65.82%화93.78%,여NDV HN공표체후무세포융합발생.FACS분석표명,돌변체급소유감합체단백F적표체효솔여야독주상비균몰유명현변화.실험결과설명재F1단백적포외비보수구중,NDV F-1화hPIV F-1저량개편단대우NDV화hPIV적특이성막융합구유중요작용;이NDV F-2화hPIV F-2저량개편단대우NDV화hPIV적막융합래강,칙특이성교저.