金色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌和副溶血弧菌单管多重PCR检测方法的建立及初步应用
금색포도구균、상한사문씨균화부용혈호균단관다중PCR검측방법적건립급초보응용
Establishment and application of multiplex PCR for diagnose Staphylococcus aureus, Salmonella typhi and Vibrio parahaemolyticus
  • 万方数据
    中国预防兽医学报 중국예방수의학보
    CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
    2006年 4期 436-440,445 ,共6页

    吴永生%刘思国%何浩%王春来%宫强%彭永刚%王牟平%罗公平%魏凤祥%孔宪刚

    오영생%류사국%하호%왕춘래%궁강%팽영강%왕모평%라공평%위봉상%공헌강

    多重PCR%金黄色葡萄球菌%副溶血性弧菌%伤寒沙门氏菌 多重PCR%金黃色葡萄毬菌%副溶血性弧菌%傷寒沙門氏菌
    다중PCR%금황색포도구균%부용혈성호균%상한사문씨균
    本研究根据金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)耐热核酸酶(nuc)基因、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi,ST)鞭毛抗原(H1-d)基因和副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)热稳定直接溶血素(tdh)基因,分别设计了三对引物Nuc-F/Nu-R、H1-d-F/H1-d-R和Tdh-F/Tdh-R,预计PCR扩增的DNA片断分别为279 bp、202 bp和458 bp.通过对单个基因PCR和单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及对单管多重PCR扩增条件如引物浓度、退火温度和dNTP浓度等的优化,建立了快速检测金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌和副溶血弧菌的单管多重PCR方法,该方法检测的敏感性分别为:47.8pg ST的基因组DNA,22.7pg SA的基因组DNA和0.3745 pg VP的基因组DNA.模拟试验显示最低检测限度为分别为:SA 150 CFU/反应体系,ST 98 CFU/反应体系,VP 53 CFU/反应体系.表明该方法具有很好的应用价值和开发前景.
    본연구근거금황색포도구균(Staphylococcus aureus,SA)내열핵산매(nuc)기인、상한사문씨균(Salmonella typhi,ST)편모항원(H1-d)기인화부용혈성호균(Vibrio parahaemolyticus,VP)열은정직접용혈소(tdh)기인,분별설계료삼대인물Nuc-F/Nu-R、H1-d-F/H1-d-R화Tdh-F/Tdh-R,예계PCR확증적DNA편단분별위279 bp、202 bp화458 bp.통과대단개기인PCR화단관다중PCR확증적특이성、민감성분석이급대단관다중PCR확증조건여인물농도、퇴화온도화dNTP농도등적우화,건립료쾌속검측금황색포도구균、상한사문씨균화부용혈호균적단관다중PCR방법,해방법검측적민감성분별위:47.8pg ST적기인조DNA,22.7pg SA적기인조DNA화0.3745 pg VP적기인조DNA.모의시험현시최저검측한도위분별위:SA 150 CFU/반응체계,ST 98 CFU/반응체계,VP 53 CFU/반응체계.표명해방법구유흔호적응용개치화개발전경.
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