中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2006年
11期
650-653
,共4页
人体β-防御素-3%定点突变%基因克隆%测序%基因表达
人體β-防禦素-3%定點突變%基因剋隆%測序%基因錶達
인체β-방어소-3%정점돌변%기인극륭%측서%기인표체
目的 从人正常皮肤组织中提取β-防御素-3基因进行定点突变后在E.coli中融合表达.方法 从人正常皮肤组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到编码β-防御素-3成熟肽的cDNA序列,测序正确后,寻找合适的突变位点,设计含突变位点的引物,用PCR重叠延伸法对β-防御素-3成熟肽cDNA序列进行定点突变,将突变产物克隆至pUC18进行序列测定及在E.coli中融合表达.结果 测序结果表明,经RT-PCR所得的β-防御素-3成熟肽序列与GeneBank中报道的编码人β-防御素-3成熟肽的cDNA序列完全一致.经过突变β-防御素-3成熟肽第29位谷氨酰胺密码子由CAG突变为精氨酸密码子CGA,其余核苷酸序列均未发生变化.将突变β-防御素-3基因在E.coli中诱导表达3～5h后可见突变β-防御素-3蛋白表达.结论 成功构建并表达了β-防御素-3突变体基因,为进一步对突变体进行真核表达、生物活性研究奠定了基础.
目的 從人正常皮膚組織中提取β-防禦素-3基因進行定點突變後在E.coli中融閤錶達.方法 從人正常皮膚組織中提取總RNA,經RT-PCR擴增得到編碼β-防禦素-3成熟肽的cDNA序列,測序正確後,尋找閤適的突變位點,設計含突變位點的引物,用PCR重疊延伸法對β-防禦素-3成熟肽cDNA序列進行定點突變,將突變產物剋隆至pUC18進行序列測定及在E.coli中融閤錶達.結果 測序結果錶明,經RT-PCR所得的β-防禦素-3成熟肽序列與GeneBank中報道的編碼人β-防禦素-3成熟肽的cDNA序列完全一緻.經過突變β-防禦素-3成熟肽第29位穀氨酰胺密碼子由CAG突變為精氨痠密碼子CGA,其餘覈苷痠序列均未髮生變化.將突變β-防禦素-3基因在E.coli中誘導錶達3～5h後可見突變β-防禦素-3蛋白錶達.結論 成功構建併錶達瞭β-防禦素-3突變體基因,為進一步對突變體進行真覈錶達、生物活性研究奠定瞭基礎.
목적 종인정상피부조직중제취β-방어소-3기인진행정점돌변후재E.coli중융합표체.방법 종인정상피부조직중제취총RNA,경RT-PCR확증득도편마β-방어소-3성숙태적cDNA서렬,측서정학후,심조합괄적돌변위점,설계함돌변위점적인물,용PCR중첩연신법대β-방어소-3성숙태cDNA서렬진행정점돌변,장돌변산물극륭지pUC18진행서렬측정급재E.coli중융합표체.결과 측서결과표명,경RT-PCR소득적β-방어소-3성숙태서렬여GeneBank중보도적편마인β-방어소-3성숙태적cDNA서렬완전일치.경과돌변β-방어소-3성숙태제29위곡안선알밀마자유CAG돌변위정안산밀마자CGA,기여핵감산서렬균미발생변화.장돌변β-방어소-3기인재E.coli중유도표체3～5h후가견돌변β-방어소-3단백표체.결론 성공구건병표체료β-방어소-3돌변체기인,위진일보대돌변체진행진핵표체、생물활성연구전정료기출.
