新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
6期
1224-1230
,共7页
晏鹏飞%苏幼红%赵银霞%庆格乐图%李江伟
晏鵬飛%囌幼紅%趙銀霞%慶格樂圖%李江偉
안붕비%소유홍%조은하%경격악도%리강위
丹毒丝菌%表面抗原A(SpaA)%免疫保护%核心区段
丹毒絲菌%錶麵抗原A(SpaA)%免疫保護%覈心區段
단독사균%표면항원A(SpaA)%면역보호%핵심구단
[目的]确定丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性抗原A(SpaA)中起免疫保护作用的主要区段.[方法]PCR扩增SpaA氨基端(spaA-N)和羧基端(spaA-C)基因片段,测序鉴定正确后,克隆至pGEX4T-1原核表达载体,以IPTG诱导表达重组蛋白r-SpaA-N及r-SpaA-C,表达产物经亲和层析柱纯化后,免疫小鼠制备抗血清,Western Blot及ELISA检测重组蛋白的免疫反应性,最后分别从主动和被动免疫两方面分析r-SpaA-N及r-SpaA-C对小鼠的免疫保护活性.[结果] Western Blot结果表明抗r-SpaA-N及r-SpaA-C小鼠血清均能与天然的SpaA在64 kDa处特异性结合,ELISA检测也表明重组表达和纯化的融合蛋白都具有免疫原性,但小鼠免疫保护实验显示只有r-SpaA-N对攻毒小鼠保护作用显著(P<0.01).[结论]丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性蛋白A起主要保护功能的核心区段为氨基端,且是由抗体介导的免疫保护.
[目的]確定丹毒絲菌新疆分離株C43150錶麵保護性抗原A(SpaA)中起免疫保護作用的主要區段.[方法]PCR擴增SpaA氨基耑(spaA-N)和羧基耑(spaA-C)基因片段,測序鑒定正確後,剋隆至pGEX4T-1原覈錶達載體,以IPTG誘導錶達重組蛋白r-SpaA-N及r-SpaA-C,錶達產物經親和層析柱純化後,免疫小鼠製備抗血清,Western Blot及ELISA檢測重組蛋白的免疫反應性,最後分彆從主動和被動免疫兩方麵分析r-SpaA-N及r-SpaA-C對小鼠的免疫保護活性.[結果] Western Blot結果錶明抗r-SpaA-N及r-SpaA-C小鼠血清均能與天然的SpaA在64 kDa處特異性結閤,ELISA檢測也錶明重組錶達和純化的融閤蛋白都具有免疫原性,但小鼠免疫保護實驗顯示隻有r-SpaA-N對攻毒小鼠保護作用顯著(P<0.01).[結論]丹毒絲菌新疆分離株C43150錶麵保護性蛋白A起主要保護功能的覈心區段為氨基耑,且是由抗體介導的免疫保護.
[목적]학정단독사균신강분리주C43150표면보호성항원A(SpaA)중기면역보호작용적주요구단.[방법]PCR확증SpaA안기단(spaA-N)화최기단(spaA-C)기인편단,측서감정정학후,극륭지pGEX4T-1원핵표체재체,이IPTG유도표체중조단백r-SpaA-N급r-SpaA-C,표체산물경친화층석주순화후,면역소서제비항혈청,Western Blot급ELISA검측중조단백적면역반응성,최후분별종주동화피동면역량방면분석r-SpaA-N급r-SpaA-C대소서적면역보호활성.[결과] Western Blot결과표명항r-SpaA-N급r-SpaA-C소서혈청균능여천연적SpaA재64 kDa처특이성결합,ELISA검측야표명중조표체화순화적융합단백도구유면역원성,단소서면역보호실험현시지유r-SpaA-N대공독소서보호작용현저(P<0.01).[결론]단독사균신강분리주C43150표면보호성단백A기주요보호공능적핵심구단위안기단,차시유항체개도적면역보호.
