CAJ | 학술논문

目的应用免疫组化、双向电泳(2-DE)结合蛋白质印迹(Western-blotting)技术分析猪囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶(GST)的表达.方法用猪带绦虫卵1 mL(8万个/mL)灌胃20d龄健康乳猪6头,于感染后40d、80d和120 d分别宰杀2头猪并取含囊尾蚴的肌肉及肝脏(120 d除外)制作4μm厚石蜡切片,采用Envision二步法,观察不同时期寄生在肌肉及肝脏的猪囊尾蚴GST的表达;同时制备感染后40d取自肌肉的猪囊尾蚴蛋白进行2-DE分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜(PVDF膜),用本课题组自制的大鼠抗猪带绦虫GST血清作为一抗、健康大鼠血清作为阴性对照进行western-blotting分析.结果不同时期寄生在肌肉及肝脏的猪囊尾蚴均表达GST,随感染时间增加,寄生在肌肉的猪囊尾蚴GST的表达变化不大(P＞0.05),寄生在肝脏的猪囊尾蚴GST的表达升高(P＜0.05);双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点,相对分子质量(Mr)为14 400～94 000,等电点(pI)为3.0～10.0.Western-blotting分析显示,实验组特异性抗原抗体阳性杂交斑点为1个,阴性对照未见阳性杂交斑点.将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析后初步确定该蛋白斑点的pI/Mr为6.6/25 548,与猪带绦虫GST的理论推导值接近.结论感染时间及感染部位组织学特征不同,猪囊尾蚴GST的表达略有差异.
목적 응용면역조화、쌍향전영(2-DE)결합단백질인적(Western-blotting)기술분석저낭미유곡광감태S-전이매(GST)적표체.방법 용저대조충란1 mL(8만개/mL)관위20d령건강유저6두,우감염후40d、80d화120 d분별재살2두저병취함낭미유적기육급간장(120 d제외)제작4μm후석사절편,채용Envision이보법,관찰불동시기기생재기육급간장적저낭미유GST적표체;동시제비감염후40d취자기육적저낭미유단백진행2-DE분석,장응효단백반점전이지취편불을희막(PVDF막),용본과제조자제적대서항저대조충GST혈청작위일항、건강대서혈청작위음성대조진행western-blotting분석.결과 불동시기기생재기육급간장적저낭미유균표체GST,수감염시간증가,기생재기육적저낭미유GST적표체변화불대(P＞0.05),기생재간장적저낭미유GST적표체승고(P＜0.05);쌍향전영응효공검측도207±9개단백질반점,상대분자질량(Mr)위14 400～94 000,등전점(pI)위3.0～10.0.Western-blotting분석현시,실험조특이성항원항체양성잡교반점위1개,음성대조미견양성잡교반점.장Western-blotting검측적항원항체양성잡교반점여원쌍향전영응효반점진행비대,조도대응단백반점,경ImageMaster 2D Platinum 5.0연건분석후초보학정해단백반점적pI/Mr위6.6/25 548,여저대조충GST적이론추도치접근.결론 감염시간급감염부위조직학특정불동,저낭미유GST적표체략유차이.