中华泌尿外科杂志
中華泌尿外科雜誌
중화비뇨외과잡지
CHINESE JOURNAL OF UROLOGY
2007年
1期
34-37
,共4页
张勇%齐进春%黎玮%蔡文清%吴建辉%王亮%连文峰%田大伟
張勇%齊進春%黎瑋%蔡文清%吳建輝%王亮%連文峰%田大偉
장용%제진춘%려위%채문청%오건휘%왕량%련문봉%전대위
人端粒酶逆转录酶%前列腺肿瘤%基因治疗%腺病毒科
人耑粒酶逆轉錄酶%前列腺腫瘤%基因治療%腺病毒科
인단립매역전록매%전렬선종류%기인치료%선병독과
目的 探讨人端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)驱动的重组腺病毒Ad-hTERT HSV-tk 结合环氧鸟苷(GCV)对人前列腺癌的治疗作用.方法 ①体外实验:用携带启动子hTERT的重组腺病毒Ad-hTERT-EGFP以及携带小鼠巨细胞病毒(CMV)启动子的重组腺病毒Ad-CMV-EGFP分别感染人前列腺癌细胞LNCaP及人正常成纤维细胞MRC-5,根据报告基因EGFP表达的不同计算病毒的细胞转染率.MTT法评估GCV对分别感染Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERTHSV-tk和Ad-CMV-HSV-tk的MRC-5细胞及LNCaP细胞的杀伤作用.②体内实验:建立人前列腺癌BALB/C裸鼠移植瘤模型,将成瘤裸鼠按随机表法分为4组,每组10只.A组为治疗组,肿瘤局部注射1.0×109 PFU/ml的Ad-hTERT-HSV-tk病毒上清0.1 ml,第1、5、10天各1次,第2～15天腹腔注射GCV 100 mg·kg-1·d-1;B组为Ad-hTERT-HSV-tk对照组,注射Ad-hTERT-HSV-tk同A组,第2～15天腹腔注射PBS;C组为GCV对照组,肿瘤局部仅注射PBS 0.1 m;,第1、5、10天各1次,注射GCV同A组;D组为阴性对照组.比较各组肿瘤体积、瘤重及肿瘤抑制率.结果 ①体外实验:当感染复数(MOI)=10时,Ad-CMV-EGFP在MRC-5及LNCaP中的转染率分别为88.41%及90.23%,二者比较差异无统计学意义(P＞0.05),而Ad-hTERT-EGFP在MRC 5及LNCaP中的转染率分别为0及66.67%,二者比较差异有统计学意义(P＜0.01).MOI=100,GCV=1000 μg/ml时,Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERT-HSV-tk和Ad-CMV-HSV-tk对MRC-5细胞的抑制率分别为0、0、1.1%和98.4%,对LNCaP细胞的抑制率分别为0、0、97.4%和99.4%.②体内实验:荷瘤裸鼠治疗后第14天,A、B、C和D组肿瘤体积分别为82.56、132.85、1 35.03和174.07 mm3;各组移植瘤重量分别为(0.49±0.22)、(1.17±0.18)、(1.35±0.19)和(1.46±0.13)g;A组的肿瘤体积和重量明显小于其它组(P＜0.01).第21天时,各组的移植瘤抑制率分别为72.55%、2.49%、12.28%和0,A组的移植瘤抑制率明显大于其它组(P＜ 0.01).结论 Ad-hTERT-HSV-tk对LNCaP细胞具有靶向杀伤作用,对MRC-5无明显杀伤作用;Ad-hTERT-HSV-tk/GCV系统对人前列腺癌裸鼠移植瘤模型具有明确的治疗作用.
目的 探討人耑粒酶逆轉錄酶啟動子(hTERT)驅動的重組腺病毒Ad-hTERT HSV-tk 結閤環氧鳥苷(GCV)對人前列腺癌的治療作用.方法 ①體外實驗:用攜帶啟動子hTERT的重組腺病毒Ad-hTERT-EGFP以及攜帶小鼠巨細胞病毒(CMV)啟動子的重組腺病毒Ad-CMV-EGFP分彆感染人前列腺癌細胞LNCaP及人正常成纖維細胞MRC-5,根據報告基因EGFP錶達的不同計算病毒的細胞轉染率.MTT法評估GCV對分彆感染Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERTHSV-tk和Ad-CMV-HSV-tk的MRC-5細胞及LNCaP細胞的殺傷作用.②體內實驗:建立人前列腺癌BALB/C裸鼠移植瘤模型,將成瘤裸鼠按隨機錶法分為4組,每組10隻.A組為治療組,腫瘤跼部註射1.0×109 PFU/ml的Ad-hTERT-HSV-tk病毒上清0.1 ml,第1、5、10天各1次,第2～15天腹腔註射GCV 100 mg·kg-1·d-1;B組為Ad-hTERT-HSV-tk對照組,註射Ad-hTERT-HSV-tk同A組,第2～15天腹腔註射PBS;C組為GCV對照組,腫瘤跼部僅註射PBS 0.1 m;,第1、5、10天各1次,註射GCV同A組;D組為陰性對照組.比較各組腫瘤體積、瘤重及腫瘤抑製率.結果 ①體外實驗:噹感染複數(MOI)=10時,Ad-CMV-EGFP在MRC-5及LNCaP中的轉染率分彆為88.41%及90.23%,二者比較差異無統計學意義(P＞0.05),而Ad-hTERT-EGFP在MRC 5及LNCaP中的轉染率分彆為0及66.67%,二者比較差異有統計學意義(P＜0.01).MOI=100,GCV=1000 μg/ml時,Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERT-HSV-tk和Ad-CMV-HSV-tk對MRC-5細胞的抑製率分彆為0、0、1.1%和98.4%,對LNCaP細胞的抑製率分彆為0、0、97.4%和99.4%.②體內實驗:荷瘤裸鼠治療後第14天,A、B、C和D組腫瘤體積分彆為82.56、132.85、1 35.03和174.07 mm3;各組移植瘤重量分彆為(0.49±0.22)、(1.17±0.18)、(1.35±0.19)和(1.46±0.13)g;A組的腫瘤體積和重量明顯小于其它組(P＜0.01).第21天時,各組的移植瘤抑製率分彆為72.55%、2.49%、12.28%和0,A組的移植瘤抑製率明顯大于其它組(P＜ 0.01).結論 Ad-hTERT-HSV-tk對LNCaP細胞具有靶嚮殺傷作用,對MRC-5無明顯殺傷作用;Ad-hTERT-HSV-tk/GCV繫統對人前列腺癌裸鼠移植瘤模型具有明確的治療作用.
목적 탐토인단립매역전록매계동자(hTERT)구동적중조선병독Ad-hTERT HSV-tk 결합배양조감(GCV)대인전렬선암적치료작용.방법 ①체외실험:용휴대계동자hTERT적중조선병독Ad-hTERT-EGFP이급휴대소서거세포병독(CMV)계동자적중조선병독Ad-CMV-EGFP분별감염인전렬선암세포LNCaP급인정상성섬유세포MRC-5,근거보고기인EGFP표체적불동계산병독적세포전염솔.MTT법평고GCV대분별감염Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERTHSV-tk화Ad-CMV-HSV-tk적MRC-5세포급LNCaP세포적살상작용.②체내실험:건립인전렬선암BALB/C라서이식류모형,장성류라서안수궤표법분위4조,매조10지.A조위치료조,종류국부주사1.0×109 PFU/ml적Ad-hTERT-HSV-tk병독상청0.1 ml,제1、5、10천각1차,제2～15천복강주사GCV 100 mg·kg-1·d-1;B조위Ad-hTERT-HSV-tk대조조,주사Ad-hTERT-HSV-tk동A조,제2～15천복강주사PBS;C조위GCV대조조,종류국부부주사PBS 0.1 m;,제1、5、10천각1차,주사GCV동A조;D조위음성대조조.비교각조종류체적、류중급종류억제솔.결과 ①체외실험:당감염복수(MOI)=10시,Ad-CMV-EGFP재MRC-5급LNCaP중적전염솔분별위88.41%급90.23%,이자비교차이무통계학의의(P＞0.05),이Ad-hTERT-EGFP재MRC 5급LNCaP중적전염솔분별위0급66.67%,이자비교차이유통계학의의(P＜0.01).MOI=100,GCV=1000 μg/ml시,Ad-hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-hTERT-HSV-tk화Ad-CMV-HSV-tk대MRC-5세포적억제솔분별위0、0、1.1%화98.4%,대LNCaP세포적억제솔분별위0、0、97.4%화99.4%.②체내실험:하류라서치료후제14천,A、B、C화D조종류체적분별위82.56、132.85、1 35.03화174.07 mm3;각조이식류중량분별위(0.49±0.22)、(1.17±0.18)、(1.35±0.19)화(1.46±0.13)g;A조적종류체적화중량명현소우기타조(P＜0.01).제21천시,각조적이식류억제솔분별위72.55%、2.49%、12.28%화0,A조적이식류억제솔명현대우기타조(P＜ 0.01).결론 Ad-hTERT-HSV-tk대LNCaP세포구유파향살상작용,대MRC-5무명현살상작용;Ad-hTERT-HSV-tk/GCV계통대인전렬선암라서이식류모형구유명학적치료작용.
