CAJ | 학술논문

目的建立和优化基于全基因组DNA芯片的细菌基因表达谱技术,并用实时定量RT-PCR对此技术平台进行评价.方法提取并纯化鼠疫耶尔森菌总RNA,以六核苷酸随机引物(N6)和/或基因组特异引物(GDP)逆转录合成cDNA,用CY染料直接或间接标记后,与包括鼠疫耶尔森菌4005个ORF的全基因组芯片杂交,通过芯片扫描仪获得表达谱分析结果,归一化后进行分析.结果用实时定量PCR技术验证.结果采用N6+GDP混合引物以间接法标记获得了较为理想的结果,表达谱技术与实时定量PCR技术所得结果高度相关,证明了此技术的可靠性和实验设计与数据分析的合理性.结论合理的设计和归一化的分析方法是基于DNA芯片的细菌基因表达谱分析成功的关键,该技术的建立为细菌功能基因组研究奠定了基础.
목적건립화우화기우전기인조DNA심편적세균기인표체보기술,병용실시정량RT-PCR대차기술평태진행평개.방법제취병순화서역야이삼균총RNA,이륙핵감산수궤인물(N6)화/혹기인조특이인물(GDP)역전록합성cDNA,용CY염료직접혹간접표기후,여포괄서역야이삼균4005개ORF적전기인조심편잡교,통과심편소묘의획득표체보분석결과,귀일화후진행분석.결과용실시정량PCR기술험증.결과채용N6+GDP혼합인물이간접법표기획득료교위이상적결과,표체보기술여실시정량PCR기술소득결과고도상관,증명료차기술적가고성화실험설계여수거분석적합이성.결론합리적설계화귀일화적분석방법시기우DNA심편적세균기인표체보분석성공적관건,해기술적건립위세균공능기인조연구전정료기출.