中华肿瘤杂志
中華腫瘤雜誌
중화종류잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY
2002年
3期
219-221
,共3页
王剑波%范宇%郭黎萍%陆士新
王劍波%範宇%郭黎萍%陸士新
왕검파%범우%곽려평%륙사신
食管癌相关基因1%蛋白-蛋白相互作用%酵母双杂交系统
食管癌相關基因1%蛋白-蛋白相互作用%酵母雙雜交繫統
식관암상관기인1%단백-단백상호작용%효모쌍잡교계통
目的筛选与食管癌相关基因1(ECRG-1)编码蛋白相互作用的蛋白,为其功能研究奠定基础.方法将编码ECRG-1羧基端378个氨基酸的DNA序列插入到pGBKT7-DNA-BD载体,与编码Gal4 DNA结合结构域的DNA序列拼接做融合基因,将此重组质粒与已克隆到pACT2载体上的人肝脏cDNA文库(与编码Gal4激活结构域的DNA序列融合)共转化酵母细胞AH109.ECRG-1与相应的人肝脏cDNA片段编码的蛋白发生相互作用后,可激活报告基因的表达.排除假阳性后,阳性克隆中的文库cDNA进行测序分析.同源性检索搜寻GenBank中与之相同或相似的序列.结果共转化得到约3×106个转化子,23个克隆有报告基因的表达.排除假阳性后,得到2个阳性克隆,它们分别编码Miz-1(myc-interacting zn finger protein-1)和FLNA(actin-binding protein-280).结论 ECRG-1基因编码蛋白在酵母中可特异性的结合Miz-1和FLNA,提示ECRG-1可能通过与MIZ-1、FLNA相互作用参与调控细胞周期的运行.
目的篩選與食管癌相關基因1(ECRG-1)編碼蛋白相互作用的蛋白,為其功能研究奠定基礎.方法將編碼ECRG-1羧基耑378箇氨基痠的DNA序列插入到pGBKT7-DNA-BD載體,與編碼Gal4 DNA結閤結構域的DNA序列拼接做融閤基因,將此重組質粒與已剋隆到pACT2載體上的人肝髒cDNA文庫(與編碼Gal4激活結構域的DNA序列融閤)共轉化酵母細胞AH109.ECRG-1與相應的人肝髒cDNA片段編碼的蛋白髮生相互作用後,可激活報告基因的錶達.排除假暘性後,暘性剋隆中的文庫cDNA進行測序分析.同源性檢索搜尋GenBank中與之相同或相似的序列.結果共轉化得到約3×106箇轉化子,23箇剋隆有報告基因的錶達.排除假暘性後,得到2箇暘性剋隆,它們分彆編碼Miz-1(myc-interacting zn finger protein-1)和FLNA(actin-binding protein-280).結論 ECRG-1基因編碼蛋白在酵母中可特異性的結閤Miz-1和FLNA,提示ECRG-1可能通過與MIZ-1、FLNA相互作用參與調控細胞週期的運行.
목적사선여식관암상관기인1(ECRG-1)편마단백상호작용적단백,위기공능연구전정기출.방법장편마ECRG-1최기단378개안기산적DNA서렬삽입도pGBKT7-DNA-BD재체,여편마Gal4 DNA결합결구역적DNA서렬병접주융합기인,장차중조질립여이극륭도pACT2재체상적인간장cDNA문고(여편마Gal4격활결구역적DNA서렬융합)공전화효모세포AH109.ECRG-1여상응적인간장cDNA편단편마적단백발생상호작용후,가격활보고기인적표체.배제가양성후,양성극륭중적문고cDNA진행측서분석.동원성검색수심GenBank중여지상동혹상사적서렬.결과공전화득도약3×106개전화자,23개극륭유보고기인적표체.배제가양성후,득도2개양성극륭,타문분별편마Miz-1(myc-interacting zn finger protein-1)화FLNA(actin-binding protein-280).결론 ECRG-1기인편마단백재효모중가특이성적결합Miz-1화FLNA,제시ECRG-1가능통과여MIZ-1、FLNA상호작용삼여조공세포주기적운행.
