CAJ | 학술논문

目的构建携带有肿瘤抑素相关T42肽(以下简称T42肽)基因的重组腺病毒载体,并转染HEK293细胞中进行病毒包装,最终感染SKBR3乳腺癌细胞,体外四倍体T42肽(4T42)抗SKBR3乳腺癌细胞的效果.方法利用同尾酶连接技术将T42肽进行两次克隆形成4T42,并将其亚克隆至穿梭质粒pEC3.1(+)-EGFP中,获得重组质粒pEC3.1(+)-EGFP-4T42.体外重组至骨架载体pAd/BLOCK-iTTM-Dest (pAd-BL-Dest),获得重组质粒pAd-EGFP-4T42.将该重组骨架质粒转染HEK293细胞,利用RT-PCR方法和荧光显微镜观察标志蛋白-绿色荧光蛋白的表达情况以判断T42转染成功与否.利用病毒倍比稀释法利用荧光显微镜检测病毒滴度,用重组腺病毒感染SKBR3乳腺癌细胞.采用流式细胞仪检测感染重组腺病毒的SKBR3胞凋亡率,MTT实验检测感染重组腺病毒的MCF细胞的生长情况.结果重组腺病毒载体经酶切鉴定证明构建正确,重组腺病毒获得成功包装,纯化的病毒滴度为4* 108 DRP/ml.重组腺病毒rAd-EGFP-4T42感染MCF细胞后较对照组未转染空白组细胞凋亡率高(P＜0.05)；Ad-EGFP-4T42质粒转染组与对照组相比,明显抑制MCF细胞生长(P＜0.05).结论体外4T42肽具有显著促进SKBR3乳腺癌细胞凋亡和抑制SKBR3乳腺癌细胞生长的作用.
목적 구건휴대유종류억소상관T42태(이하간칭T42태)기인적중조선병독재체,병전염HEK293세포중진행병독포장,최종감염SKBR3유선암세포,체외사배체T42태(4T42)항SKBR3유선암세포적효과.방법 이용동미매련접기술장T42태진행량차극륭형성4T42,병장기아극륭지천사질립pEC3.1(+)-EGFP중,획득중조질립pEC3.1(+)-EGFP-4T42.체외중조지골가재체pAd/BLOCK-iTTM-Dest (pAd-BL-Dest),획득중조질립pAd-EGFP-4T42.장해중조골가질립전염HEK293세포,이용RT-PCR방법화형광현미경관찰표지단백-록색형광단백적표체정황이판단T42전염성공여부.이용병독배비희석법이용형광현미경검측병독적도,용중조선병독감염SKBR3유선암세포.채용류식세포의검측감염중조선병독적SKBR3포조망솔,MTT실험검측감염중조선병독적MCF세포적생장정황.결과 중조선병독재체경매절감정증명구건정학,중조선병독획득성공포장,순화적병독적도위4* 108 DRP/ml.중조선병독rAd-EGFP-4T42감염MCF세포후교대조조미전염공백조세포조망솔고(P＜0.05)；Ad-EGFP-4T42질립전염조여대조조상비,명현억제MCF세포생장(P＜0.05).결론 체외4T42태구유현저촉진SKBR3유선암세포조망화억제SKBR3유선암세포생장적작용.