中华临床医师杂志（电子版）
中華臨床醫師雜誌（電子版）
중화림상의사잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2012年
16期
4626-4629
,共4页
腺病毒科%糖尿病%Apelin-R
腺病毒科%糖尿病%Apelin-R
선병독과%당뇨병%Apelin-R
目的 构建含有人Apelin受体(Apelin-R)基因的pDC316-apelinR-EGFP腺病毒穿梭载体,为糖尿病相关基因Apelin的体内研究提供新方法.方法 PCR方法分别扩增Apelin-R基因,测序正确后与载体pDC316-EGFP连接,构建重组腺病毒载体pDC316-apelinR-EGFP;脂质体法与腺病毒骨架载体共转染HEK293细胞进行重组腺病毒包装,稀释法测定腺病毒滴度.RT-PCR和Western blot方法检测Apelin-R的表达.结果 限制性核酸内切酶鉴定及测序结果均证明Apelin-R基因成功扩增并克隆到重组腺病毒载体pDC316-apelinR-EGFP.在HEK293中成功包装出含Apelin-R的腺病毒Ad-apelinR-EGFP,病毒滴度为3.1×109 TCID50/ml,感染Ad-apelinR-EGFP的HEK293E细胞中可检测到Apelin-R的mRNA和蛋白表达.结论 成功构建了真核表达载体pDC316-apelinR-EGFP,得到了表达绿色荧光蛋白的Apelin-R腺病毒,该病毒有望用于糖尿病的体内研究实验.
目的 構建含有人Apelin受體(Apelin-R)基因的pDC316-apelinR-EGFP腺病毒穿梭載體,為糖尿病相關基因Apelin的體內研究提供新方法.方法 PCR方法分彆擴增Apelin-R基因,測序正確後與載體pDC316-EGFP連接,構建重組腺病毒載體pDC316-apelinR-EGFP;脂質體法與腺病毒骨架載體共轉染HEK293細胞進行重組腺病毒包裝,稀釋法測定腺病毒滴度.RT-PCR和Western blot方法檢測Apelin-R的錶達.結果 限製性覈痠內切酶鑒定及測序結果均證明Apelin-R基因成功擴增併剋隆到重組腺病毒載體pDC316-apelinR-EGFP.在HEK293中成功包裝齣含Apelin-R的腺病毒Ad-apelinR-EGFP,病毒滴度為3.1×109 TCID50/ml,感染Ad-apelinR-EGFP的HEK293E細胞中可檢測到Apelin-R的mRNA和蛋白錶達.結論 成功構建瞭真覈錶達載體pDC316-apelinR-EGFP,得到瞭錶達綠色熒光蛋白的Apelin-R腺病毒,該病毒有望用于糖尿病的體內研究實驗.
목적 구건함유인Apelin수체(Apelin-R)기인적pDC316-apelinR-EGFP선병독천사재체,위당뇨병상관기인Apelin적체내연구제공신방법.방법 PCR방법분별확증Apelin-R기인,측서정학후여재체pDC316-EGFP련접,구건중조선병독재체pDC316-apelinR-EGFP;지질체법여선병독골가재체공전염HEK293세포진행중조선병독포장,희석법측정선병독적도.RT-PCR화Western blot방법검측Apelin-R적표체.결과 한제성핵산내절매감정급측서결과균증명Apelin-R기인성공확증병극륭도중조선병독재체pDC316-apelinR-EGFP.재HEK293중성공포장출함Apelin-R적선병독Ad-apelinR-EGFP,병독적도위3.1×109 TCID50/ml,감염Ad-apelinR-EGFP적HEK293E세포중가검측도Apelin-R적mRNA화단백표체.결론 성공구건료진핵표체재체pDC316-apelinR-EGFP,득도료표체록색형광단백적Apelin-R선병독,해병독유망용우당뇨병적체내연구실험.
