湖南农业科学
湖南農業科學
호남농업과학
HUNAN AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
1期
107-110
,共4页
李全健%王彩霞%田敏%李翠新
李全健%王綵霞%田敏%李翠新
리전건%왕채하%전민%리취신
扇脉杓兰%基因组DNA%扩增片段长度%多态性
扇脈杓蘭%基因組DNA%擴增片段長度%多態性
선맥표란%기인조DNA%확증편단장도%다태성
通过SDS法、高盐低pH法、常规CTAB法、高盐CTAB法和改良CTAB法提取扇脉杓兰(Cypripedium japonicum Thunb.)幼叶基因组DNA,并对其AFLP反应体系进行了优化.结果表明:改良CTAB法所提取的DNA电泳条带清晰无污染,A260和A280比值在1.8～2.0,用限制性内切酶酶切后条带均一,酶切时间以4h为宜.最终确定50 μL PCR反应体系的最佳条件为:预扩增产物稀释20倍4μL,dNTP(2.5 mmol/L)3 μL,Mg2+(25 mmol/L)4 μL,Mse I(10 μmol/L)和EcoR I(10 μmol/L)各1.5 μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.3 μL.
通過SDS法、高鹽低pH法、常規CTAB法、高鹽CTAB法和改良CTAB法提取扇脈杓蘭(Cypripedium japonicum Thunb.)幼葉基因組DNA,併對其AFLP反應體繫進行瞭優化.結果錶明:改良CTAB法所提取的DNA電泳條帶清晰無汙染,A260和A280比值在1.8～2.0,用限製性內切酶酶切後條帶均一,酶切時間以4h為宜.最終確定50 μL PCR反應體繫的最佳條件為:預擴增產物稀釋20倍4μL,dNTP(2.5 mmol/L)3 μL,Mg2+(25 mmol/L)4 μL,Mse I(10 μmol/L)和EcoR I(10 μmol/L)各1.5 μL,Taq DNA聚閤酶(5 U/μL)0.3 μL.
통과SDS법、고염저pH법、상규CTAB법、고염CTAB법화개량CTAB법제취선맥표란(Cypripedium japonicum Thunb.)유협기인조DNA,병대기AFLP반응체계진행료우화.결과표명:개량CTAB법소제취적DNA전영조대청석무오염,A260화A280비치재1.8～2.0,용한제성내절매매절후조대균일,매절시간이4h위의.최종학정50 μL PCR반응체계적최가조건위:예확증산물희석20배4μL,dNTP(2.5 mmol/L)3 μL,Mg2+(25 mmol/L)4 μL,Mse I(10 μmol/L)화EcoR I(10 μmol/L)각1.5 μL,Taq DNA취합매(5 U/μL)0.3 μL.
