CAJ | 학술논문

目的:研究靶向甲基化转移酶1(DNMT1)基因的Stealth核糖核苷酸干扰(RNAi)技术对胰腺癌细胞Panc-1中DNMT1表达的抑制作用.方法:通过Block-IT TM RNAi Designer在线设计合成针对DNMT1的Stealth核糖核苷酸(siRNA),以50 nM siRNA用脂质体转染法转染Panc-1细胞.同时设空白对照组,RNAi阴性对照组,荧光RNAi组,每组3个复孔；在转染24 h、48h、72h后用荧光显微镜观察转染效率,以48h荧光强度最亮.应用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)检测DMNT1信使核糖核酸(mRNA)含量,免疫印迹(Western blot)检测DNMT1蛋白的表达.结果:将靶向DNMT1基因Stealth RNAi转染到胰腺癌细胞Panc-1中后,Panc-1细胞在转染RNAi后48h的转染效率为50％～60％；DNMT1的蛋白和mRNA水平显著下调,与对照组相比,转染后48h的相对抑制率分别为68％和67.8％(P＜0.05),也显著低于空白对照组及空载体组(P＜0.05).结论:DNMT1靶向的Stealth RNA瞬时转染到胰腺癌细胞Panc-1中可显著沉默DNMT1的基因和蛋白的表达,为胰腺癌的基因治疗提供新的理论依据.
목적:연구파향갑기화전이매1(DNMT1)기인적Stealth핵당핵감산간우(RNAi)기술대이선암세포Panc-1중DNMT1표체적억제작용.방법:통과Block-IT TM RNAi Designer재선설계합성침대DNMT1적Stealth핵당핵감산(siRNA),이50 nM siRNA용지질체전염법전염Panc-1세포.동시설공백대조조,RNAi음성대조조,형광RNAi조,매조3개복공；재전염24 h、48h、72h후용형광현미경관찰전염효솔,이48h형광강도최량.응용역전록취합매련반응(RT- PCR)검측DMNT1신사핵당핵산(mRNA)함량,면역인적(Western blot)검측DNMT1단백적표체.결과:장파향DNMT1기인Stealth RNAi전염도이선암세포Panc-1중후,Panc-1세포재전염RNAi후48h적전염효솔위50％～60％；DNMT1적단백화mRNA수평현저하조,여대조조상비,전염후48h적상대억제솔분별위68％화67.8％(P＜0.05),야현저저우공백대조조급공재체조(P＜0.05).결론:DNMT1파향적Stealth RNA순시전염도이선암세포Panc-1중가현저침묵DNMT1적기인화단백적표체,위이선암적기인치료제공신적이론의거.