现代泌尿生殖肿瘤杂志
現代泌尿生殖腫瘤雜誌
현대비뇨생식종류잡지
JOURNAL OF CONTEMPORARY UROLOGIC AND REPRODUCTIVE ONCOLOGY
2011年
5期
283-286
,共4页
龚化%陈忠%胡嘏%吴嘉%李龙承%杨为民%叶章群
龔化%陳忠%鬍嘏%吳嘉%李龍承%楊為民%葉章群
공화%진충%호하%오가%리룡승%양위민%협장군
前列腺肿瘤%RNA激活%dsRNA表达质粒
前列腺腫瘤%RNA激活%dsRNA錶達質粒
전렬선종류%RNA격활%dsRNA표체질립
目的 构建可表达具有RNA激活功能的小激活RNA(saRNA)质粒表达载体,并对其激活前列腺癌细胞PC-3中p21WAF1/CIP1(p21)基因表达的功能进行相关研究.方法 人工合成与p21基因启动子特定序列相应的DNA片段及同样长度的随机DNA序列,利用DNA重组技术将这些片段构建到真核小分子双链RNA(dsRNA)表达质粒pGenesil-1中,构建成能表达dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNAp21-pGenesil-1)和随机对照dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNACon-pGenesil-1).采用脂质体介导方法,分别将dsRNAp21-pGenesil-1(实验组)、dsRNACon-pGenesil-1(随机对照组)及空白质粒pGenesil-1(空白对照组)转染到体外培养的PC-3细胞,通过荧光染色检测转染效率,采用RT-PCR和免疫组化技术检测各组细胞p21蛋白表达的差异.结果成功构建目的 表达载体dsRNAp21-pGenesil-1及随机对照载体dsRNACon-pGenesil-1,将各组质粒转染到PC-3细胞后,实验组p21基因表达明显增强,而随机对照组和空白对照组无明显变化.结论 本研究构建的dsRNA表达质粒载体能成功表达saRNA分子,并激活p21基因及蛋白的表达,为研究saRNA的RNA激活效应提供有效工具.
目的 構建可錶達具有RNA激活功能的小激活RNA(saRNA)質粒錶達載體,併對其激活前列腺癌細胞PC-3中p21WAF1/CIP1(p21)基因錶達的功能進行相關研究.方法 人工閤成與p21基因啟動子特定序列相應的DNA片段及同樣長度的隨機DNA序列,利用DNA重組技術將這些片段構建到真覈小分子雙鏈RNA(dsRNA)錶達質粒pGenesil-1中,構建成能錶達dsRNA片段的錶達質粒載體(dsRNAp21-pGenesil-1)和隨機對照dsRNA片段的錶達質粒載體(dsRNACon-pGenesil-1).採用脂質體介導方法,分彆將dsRNAp21-pGenesil-1(實驗組)、dsRNACon-pGenesil-1(隨機對照組)及空白質粒pGenesil-1(空白對照組)轉染到體外培養的PC-3細胞,通過熒光染色檢測轉染效率,採用RT-PCR和免疫組化技術檢測各組細胞p21蛋白錶達的差異.結果成功構建目的 錶達載體dsRNAp21-pGenesil-1及隨機對照載體dsRNACon-pGenesil-1,將各組質粒轉染到PC-3細胞後,實驗組p21基因錶達明顯增彊,而隨機對照組和空白對照組無明顯變化.結論 本研究構建的dsRNA錶達質粒載體能成功錶達saRNA分子,併激活p21基因及蛋白的錶達,為研究saRNA的RNA激活效應提供有效工具.
목적 구건가표체구유RNA격활공능적소격활RNA(saRNA)질립표체재체,병대기격활전렬선암세포PC-3중p21WAF1/CIP1(p21)기인표체적공능진행상관연구.방법 인공합성여p21기인계동자특정서렬상응적DNA편단급동양장도적수궤DNA서렬,이용DNA중조기술장저사편단구건도진핵소분자쌍련RNA(dsRNA)표체질립pGenesil-1중,구건성능표체dsRNA편단적표체질립재체(dsRNAp21-pGenesil-1)화수궤대조dsRNA편단적표체질립재체(dsRNACon-pGenesil-1).채용지질체개도방법,분별장dsRNAp21-pGenesil-1(실험조)、dsRNACon-pGenesil-1(수궤대조조)급공백질립pGenesil-1(공백대조조)전염도체외배양적PC-3세포,통과형광염색검측전염효솔,채용RT-PCR화면역조화기술검측각조세포p21단백표체적차이.결과성공구건목적 표체재체dsRNAp21-pGenesil-1급수궤대조재체dsRNACon-pGenesil-1,장각조질립전염도PC-3세포후,실험조p21기인표체명현증강,이수궤대조조화공백대조조무명현변화.결론 본연구구건적dsRNA표체질립재체능성공표체saRNA분자,병격활p21기인급단백적표체,위연구saRNA적RNA격활효응제공유효공구.