军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2011年
10期
732-736
,共5页
张岭%王新兴%战锐%弓景波%钱令嘉
張嶺%王新興%戰銳%弓景波%錢令嘉
장령%왕신흥%전예%궁경파%전령가
SELEX%皮质醇%核酸适体%纳米技术
SELEX%皮質醇%覈痠適體%納米技術
SELEX%피질순%핵산괄체%납미기술
目的 通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术获得皮质醇特异性核酸适体,建立高品质、超敏、易用和稳定的皮质醇检测试剂盒.方法 人工合成两端固定序列,中间为35 bp随机序列,生成80 bp长度ssDNA文库,捕获序列固定在磁珠上,文库与其退火组装,皮质醇的特异核酸适体通过我们建立的靶标诱导变构解离SELEX(TISSD-SELEX)技术获得.最后一轮的PCR产物经克隆测序,MegAlign 和RNAstructure软件分析其一级和二级结构.实时(real-time)apta-PCR方法分析G12的亲和活性.结果 经过12轮筛选后,获得10个皮质醇的核酸适体.序列分析显示,特异核酸适体以高G含量核酸序列为主,软件预测其中8个序列主要以G四联体二级结构为主,候选核酸适体 G12显示了可以作为生物探针用于皮质醇检测.结论 成功建立TISSD-SELEX技术,获得小分子靶标皮质醇核酸适体.小分子靶标无需将其偶联在固相介质或大分子上,对靶分子结构、性质无特殊要求,因而有望成为小分子靶标核酸适体筛选的通用技术方法.
目的 通過指數富集配體繫統進化(SELEX)技術穫得皮質醇特異性覈痠適體,建立高品質、超敏、易用和穩定的皮質醇檢測試劑盒.方法 人工閤成兩耑固定序列,中間為35 bp隨機序列,生成80 bp長度ssDNA文庫,捕穫序列固定在磁珠上,文庫與其退火組裝,皮質醇的特異覈痠適體通過我們建立的靶標誘導變構解離SELEX(TISSD-SELEX)技術穫得.最後一輪的PCR產物經剋隆測序,MegAlign 和RNAstructure軟件分析其一級和二級結構.實時(real-time)apta-PCR方法分析G12的親和活性.結果 經過12輪篩選後,穫得10箇皮質醇的覈痠適體.序列分析顯示,特異覈痠適體以高G含量覈痠序列為主,軟件預測其中8箇序列主要以G四聯體二級結構為主,候選覈痠適體 G12顯示瞭可以作為生物探針用于皮質醇檢測.結論 成功建立TISSD-SELEX技術,穫得小分子靶標皮質醇覈痠適體.小分子靶標無需將其偶聯在固相介質或大分子上,對靶分子結構、性質無特殊要求,因而有望成為小分子靶標覈痠適體篩選的通用技術方法.
목적 통과지수부집배체계통진화(SELEX)기술획득피질순특이성핵산괄체,건립고품질、초민、역용화은정적피질순검측시제합.방법 인공합성량단고정서렬,중간위35 bp수궤서렬,생성80 bp장도ssDNA문고,포획서렬고정재자주상,문고여기퇴화조장,피질순적특이핵산괄체통과아문건립적파표유도변구해리SELEX(TISSD-SELEX)기술획득.최후일륜적PCR산물경극륭측서,MegAlign 화RNAstructure연건분석기일급화이급결구.실시(real-time)apta-PCR방법분석G12적친화활성.결과 경과12륜사선후,획득10개피질순적핵산괄체.서렬분석현시,특이핵산괄체이고G함량핵산서렬위주,연건예측기중8개서렬주요이G사련체이급결구위주,후선핵산괄체 G12현시료가이작위생물탐침용우피질순검측.결론 성공건립TISSD-SELEX기술,획득소분자파표피질순핵산괄체.소분자파표무수장기우련재고상개질혹대분자상,대파분자결구、성질무특수요구,인이유망성위소분자파표핵산괄체사선적통용기술방법.
