中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
8期
681-685,695
,共6页
黄莉%孙杰%郭静雅%高增燕%邱玉华
黃莉%孫傑%郭靜雅%高增燕%邱玉華
황리%손걸%곽정아%고증연%구옥화
CD86%siRNA%免疫耐受%共刺激分子
CD86%siRNA%免疫耐受%共刺激分子
CD86%siRNA%면역내수%공자격분자
目的:通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抗原递呈细胞(Antigen presenting cells,APC)表面共刺激分子CD86的表达,分析其对T细胞增殖和白介素10及IFN-γ分泌的影响,为移植排异和自身免疫性疾病的治疗提供新的思路和方法.方法:设计并通过化学方法合成三对针对人CD86 mRNA的siRNA片段(siRNA-1、2、3),脂质体法转染人B淋巴瘤Raji细胞;转染24、48、72小时后,流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测Raji细胞表面CD86蛋白水平的表达;荧光定量PCR方法检测CD86mRNA水平的表达;分别采用siRNA抑制Raji细胞表面CD86分子的表达、抗人CD86单克隆抗体封闭CD86分子以及二者的联合来阻断CD86-CD28信号通路、MTT和ELISA方法分别检测CD86信号通路被抑制后对T细胞增殖和细胞因子IL-10及IFN-γ分泌的影响.结果:FCM结果显示,Raji细胞表面天然表达CD86的阳性率约为98.0%;转染siRNA后24小时时,仅siRNA-2组表现较为明显的抑制效应,此时细胞表面CD86的阳性表达率约为61.7%,抑制率为37.0%;转染后48小时,control和siRNA-1组Raji细胞表面CD86的表达仍没有变化,而siRNA-2组CD86的表达下降至39.6%,抑制率为59.6%,siRNA-3组CD86的表达下降至72.6%,抑制率为25.9%;siRNA转染后72小时,各组Raji细胞表面CD86的表达均有不同程度的变化,分别为:control组,90.4%;siRNA-1组,83.1%;siRNA-2组,15.2% 和siRNA-3组,46.2%;各组的抑制率依次为7.6%,15.2%,84.5% 及52.8%.荧光定量PCR结果显示,转染后72小时,仅siRNA-2和siRNA-3组CD86 mRNA水平的表达与Raji细胞相比有显著差异,抑制率分别为78.7%和45.9%.CD86的表达被siRNA-2抑制后,可抑制Raji细胞对T细胞的活化、增殖和IL-10及IFN-γ的分泌;抗人CD86单克隆抗体同样可以抑制Raji细胞对T细胞的激活;并且siRNA-2和抗人CD86单克隆抗体对T细胞的活化抑制具有协同效应.结论:通过siRNA沉默抗原递呈细胞表面共刺激分子CD86的表达,从而阻断CD86/CD28共刺激信号通路,可有效抑制T淋巴细胞的活化、增殖及细胞因子IL-10、IFN-γ的分泌,由此削弱了T细胞应答来诱导免疫耐受.
目的:通過小榦擾RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默抗原遞呈細胞(Antigen presenting cells,APC)錶麵共刺激分子CD86的錶達,分析其對T細胞增殖和白介素10及IFN-γ分泌的影響,為移植排異和自身免疫性疾病的治療提供新的思路和方法.方法:設計併通過化學方法閤成三對針對人CD86 mRNA的siRNA片段(siRNA-1、2、3),脂質體法轉染人B淋巴瘤Raji細胞;轉染24、48、72小時後,流式細胞術(Flow cytometry,FCM)檢測Raji細胞錶麵CD86蛋白水平的錶達;熒光定量PCR方法檢測CD86mRNA水平的錶達;分彆採用siRNA抑製Raji細胞錶麵CD86分子的錶達、抗人CD86單剋隆抗體封閉CD86分子以及二者的聯閤來阻斷CD86-CD28信號通路、MTT和ELISA方法分彆檢測CD86信號通路被抑製後對T細胞增殖和細胞因子IL-10及IFN-γ分泌的影響.結果:FCM結果顯示,Raji細胞錶麵天然錶達CD86的暘性率約為98.0%;轉染siRNA後24小時時,僅siRNA-2組錶現較為明顯的抑製效應,此時細胞錶麵CD86的暘性錶達率約為61.7%,抑製率為37.0%;轉染後48小時,control和siRNA-1組Raji細胞錶麵CD86的錶達仍沒有變化,而siRNA-2組CD86的錶達下降至39.6%,抑製率為59.6%,siRNA-3組CD86的錶達下降至72.6%,抑製率為25.9%;siRNA轉染後72小時,各組Raji細胞錶麵CD86的錶達均有不同程度的變化,分彆為:control組,90.4%;siRNA-1組,83.1%;siRNA-2組,15.2% 和siRNA-3組,46.2%;各組的抑製率依次為7.6%,15.2%,84.5% 及52.8%.熒光定量PCR結果顯示,轉染後72小時,僅siRNA-2和siRNA-3組CD86 mRNA水平的錶達與Raji細胞相比有顯著差異,抑製率分彆為78.7%和45.9%.CD86的錶達被siRNA-2抑製後,可抑製Raji細胞對T細胞的活化、增殖和IL-10及IFN-γ的分泌;抗人CD86單剋隆抗體同樣可以抑製Raji細胞對T細胞的激活;併且siRNA-2和抗人CD86單剋隆抗體對T細胞的活化抑製具有協同效應.結論:通過siRNA沉默抗原遞呈細胞錶麵共刺激分子CD86的錶達,從而阻斷CD86/CD28共刺激信號通路,可有效抑製T淋巴細胞的活化、增殖及細胞因子IL-10、IFN-γ的分泌,由此削弱瞭T細胞應答來誘導免疫耐受.
목적:통과소간우RNA(small interfering RNA,siRNA)침묵항원체정세포(Antigen presenting cells,APC)표면공자격분자CD86적표체,분석기대T세포증식화백개소10급IFN-γ분비적영향,위이식배이화자신면역성질병적치료제공신적사로화방법.방법:설계병통과화학방법합성삼대침대인CD86 mRNA적siRNA편단(siRNA-1、2、3),지질체법전염인B림파류Raji세포;전염24、48、72소시후,류식세포술(Flow cytometry,FCM)검측Raji세포표면CD86단백수평적표체;형광정량PCR방법검측CD86mRNA수평적표체;분별채용siRNA억제Raji세포표면CD86분자적표체、항인CD86단극륭항체봉폐CD86분자이급이자적연합래조단CD86-CD28신호통로、MTT화ELISA방법분별검측CD86신호통로피억제후대T세포증식화세포인자IL-10급IFN-γ분비적영향.결과:FCM결과현시,Raji세포표면천연표체CD86적양성솔약위98.0%;전염siRNA후24소시시,부siRNA-2조표현교위명현적억제효응,차시세포표면CD86적양성표체솔약위61.7%,억제솔위37.0%;전염후48소시,control화siRNA-1조Raji세포표면CD86적표체잉몰유변화,이siRNA-2조CD86적표체하강지39.6%,억제솔위59.6%,siRNA-3조CD86적표체하강지72.6%,억제솔위25.9%;siRNA전염후72소시,각조Raji세포표면CD86적표체균유불동정도적변화,분별위:control조,90.4%;siRNA-1조,83.1%;siRNA-2조,15.2% 화siRNA-3조,46.2%;각조적억제솔의차위7.6%,15.2%,84.5% 급52.8%.형광정량PCR결과현시,전염후72소시,부siRNA-2화siRNA-3조CD86 mRNA수평적표체여Raji세포상비유현저차이,억제솔분별위78.7%화45.9%.CD86적표체피siRNA-2억제후,가억제Raji세포대T세포적활화、증식화IL-10급IFN-γ적분비;항인CD86단극륭항체동양가이억제Raji세포대T세포적격활;병차siRNA-2화항인CD86단극륭항체대T세포적활화억제구유협동효응.결론:통과siRNA침묵항원체정세포표면공자격분자CD86적표체,종이조단CD86/CD28공자격신호통로,가유효억제T림파세포적활화、증식급세포인자IL-10、IFN-γ적분비,유차삭약료T세포응답래유도면역내수.
