中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
32期
6249-6254
,共6页
赖颖晖%赖永榕%王明月%杨高晖
賴穎暉%賴永榕%王明月%楊高暉
뢰영휘%뢰영용%왕명월%양고휘
动物模型%NOD/SCID小鼠%人源化%细胞移植
動物模型%NOD/SCID小鼠%人源化%細胞移植
동물모형%NOD/SCID소서%인원화%세포이식
背景:人源化非肥胖精尿病,重症联合免疫缺陷(nonobese diabetic/severe combined immunodeftcient,NOD/SCID)小鼠模型在生物及医学科学研究中被广泛应用,而提高人源化NOD/SCID小鼠模型中的人源化水平是研究者的迫切需要.目的:探讨提高人源化NOD/SCID小鼠模型人源化水平的措施.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-11/2009-01在广西医科大学实验动物中心及广西医科大学第一附属医院完成.材料:雄性NOD/SCID小鼠14只,体质量(25.0±1.5)g;1例骨髓标本约6 mL(多部位分层次采集)取自健康志愿者;1例足月脐带血标本大约90 mL,取自广西医科大学第一附属医院产科,为健康产妇.方法:无菌抗凝的正常骨髓及足月脐带血样本均在采集后6 h内处理.密度梯度离心法分离单个核细胞.将14只小鼠标号电脑随机分为5组:全身照射,环磷酰胺骨髓移植组(n=3),全身照射,环磷酰胺脐血移植组(n=3),全身照射骨髓移植组(n=3),全身照射脐血移植组(n=3),空白对照组(n=2).将人骨髓或脐血单个核细胞分别移植给经不同方案和剂量预处理的各组小鼠,移植后给小鼠腹腔注射重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子及重组人促红细胞生成素.主要观察指标:各组小鼠输注的细胞数,小鼠存活情况并计算死亡率,移植6周后流式细胞仪检测小鼠骨髓及外周血人CD45+细胞比例.结果:全身照射/环磷酰胺骨髓移植组、全身照射骨髓移植组和全身照射,环磷酰胺脐血移植组、全身照射脐血移植组小鼠输注人单个核细胞数分别为(0.656 0±0.008 9)×106和(4.077 5±0.845 0)×106.全身照射,环磷酰胺组死亡率均为100%,全身照射组死亡率均为33.3%.全身照射后再加环磷酰胺,小鼠不能耐受;而全身照射剂量越大,死亡率越高,当达400 cGy时,死亡率100%.存活小鼠移植6周后,流式细胞仪检测小鼠骨髓中人CD45+细胞的比例,全身照射脐血移植组13号和6号小鼠分别为59.61%和21.46%,而全身照射骨髓移植组2号和8号小鼠其比例均为0,空白对照组小鼠比例均为0.而在13号小鼠骨髓细胞中,CD33+细胞比例为13.13%,GlyA+CD45-细胞比例为20.21%.结论:要建寺人源化NODISCID小鼠模型,所输入的造血干细胞数量一定要达到阈剂量,而在可耐受的范围内,尽可能提高预处理的强度,并使用人细胞因子可提高人源化NOD,SCID小鼠模型的人源化比例.
揹景:人源化非肥胖精尿病,重癥聯閤免疫缺陷(nonobese diabetic/severe combined immunodeftcient,NOD/SCID)小鼠模型在生物及醫學科學研究中被廣汎應用,而提高人源化NOD/SCID小鼠模型中的人源化水平是研究者的迫切需要.目的:探討提高人源化NOD/SCID小鼠模型人源化水平的措施.設計、時間及地點:隨機對照動物實驗,于2008-11/2009-01在廣西醫科大學實驗動物中心及廣西醫科大學第一附屬醫院完成.材料:雄性NOD/SCID小鼠14隻,體質量(25.0±1.5)g;1例骨髓標本約6 mL(多部位分層次採集)取自健康誌願者;1例足月臍帶血標本大約90 mL,取自廣西醫科大學第一附屬醫院產科,為健康產婦.方法:無菌抗凝的正常骨髓及足月臍帶血樣本均在採集後6 h內處理.密度梯度離心法分離單箇覈細胞.將14隻小鼠標號電腦隨機分為5組:全身照射,環燐酰胺骨髓移植組(n=3),全身照射,環燐酰胺臍血移植組(n=3),全身照射骨髓移植組(n=3),全身照射臍血移植組(n=3),空白對照組(n=2).將人骨髓或臍血單箇覈細胞分彆移植給經不同方案和劑量預處理的各組小鼠,移植後給小鼠腹腔註射重組人粒-巨噬細胞集落刺激因子及重組人促紅細胞生成素.主要觀察指標:各組小鼠輸註的細胞數,小鼠存活情況併計算死亡率,移植6週後流式細胞儀檢測小鼠骨髓及外週血人CD45+細胞比例.結果:全身照射/環燐酰胺骨髓移植組、全身照射骨髓移植組和全身照射,環燐酰胺臍血移植組、全身照射臍血移植組小鼠輸註人單箇覈細胞數分彆為(0.656 0±0.008 9)×106和(4.077 5±0.845 0)×106.全身照射,環燐酰胺組死亡率均為100%,全身照射組死亡率均為33.3%.全身照射後再加環燐酰胺,小鼠不能耐受;而全身照射劑量越大,死亡率越高,噹達400 cGy時,死亡率100%.存活小鼠移植6週後,流式細胞儀檢測小鼠骨髓中人CD45+細胞的比例,全身照射臍血移植組13號和6號小鼠分彆為59.61%和21.46%,而全身照射骨髓移植組2號和8號小鼠其比例均為0,空白對照組小鼠比例均為0.而在13號小鼠骨髓細胞中,CD33+細胞比例為13.13%,GlyA+CD45-細胞比例為20.21%.結論:要建寺人源化NODISCID小鼠模型,所輸入的造血榦細胞數量一定要達到閾劑量,而在可耐受的範圍內,儘可能提高預處理的彊度,併使用人細胞因子可提高人源化NOD,SCID小鼠模型的人源化比例.
배경:인원화비비반정뇨병,중증연합면역결함(nonobese diabetic/severe combined immunodeftcient,NOD/SCID)소서모형재생물급의학과학연구중피엄범응용,이제고인원화NOD/SCID소서모형중적인원화수평시연구자적박절수요.목적:탐토제고인원화NOD/SCID소서모형인원화수평적조시.설계、시간급지점:수궤대조동물실험,우2008-11/2009-01재엄서의과대학실험동물중심급엄서의과대학제일부속의원완성.재료:웅성NOD/SCID소서14지,체질량(25.0±1.5)g;1례골수표본약6 mL(다부위분층차채집)취자건강지원자;1례족월제대혈표본대약90 mL,취자엄서의과대학제일부속의원산과,위건강산부.방법:무균항응적정상골수급족월제대혈양본균재채집후6 h내처리.밀도제도리심법분리단개핵세포.장14지소서표호전뇌수궤분위5조:전신조사,배린선알골수이식조(n=3),전신조사,배린선알제혈이식조(n=3),전신조사골수이식조(n=3),전신조사제혈이식조(n=3),공백대조조(n=2).장인골수혹제혈단개핵세포분별이식급경불동방안화제량예처리적각조소서,이식후급소서복강주사중조인립-거서세포집락자격인자급중조인촉홍세포생성소.주요관찰지표:각조소서수주적세포수,소서존활정황병계산사망솔,이식6주후류식세포의검측소서골수급외주혈인CD45+세포비례.결과:전신조사/배린선알골수이식조、전신조사골수이식조화전신조사,배린선알제혈이식조、전신조사제혈이식조소서수주인단개핵세포수분별위(0.656 0±0.008 9)×106화(4.077 5±0.845 0)×106.전신조사,배린선알조사망솔균위100%,전신조사조사망솔균위33.3%.전신조사후재가배린선알,소서불능내수;이전신조사제량월대,사망솔월고,당체400 cGy시,사망솔100%.존활소서이식6주후,류식세포의검측소서골수중인CD45+세포적비례,전신조사제혈이식조13호화6호소서분별위59.61%화21.46%,이전신조사골수이식조2호화8호소서기비례균위0,공백대조조소서비례균위0.이재13호소서골수세포중,CD33+세포비례위13.13%,GlyA+CD45-세포비례위20.21%.결론:요건사인원화NODISCID소서모형,소수입적조혈간세포수량일정요체도역제량,이재가내수적범위내,진가능제고예처리적강도,병사용인세포인자가제고인원화NOD,SCID소서모형적인원화비례.
