CAJ | 학술논문

利用含胶质源性神经营养因子(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)基因的慢病毒载体转染了人胚胎来源的神经干细胞,探讨了转染后GDNF在神经干细胞中的体外表达水平及其影响因素.首先GDNF基因被克隆入慢病毒载体,通过瞬时转染法包装出病毒上清,经滴度鉴定后分别按拷贝数为1、2.5、5、10转染神经干细胞.转染后细胞经过潮霉素筛选得到均一表达GDNF的神经干细胞体系.其后分别利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Real-timePCR方法测定不同转染组细胞在不同时间点GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平.实验中构建了表达GDNF基因的慢病毒载体,包装出的病毒上清在体外培养条件下成功转染了神经干细胞,经潮霉素筛选可以得到均一的持续表达分泌GDNF的人胚胎皮层神经干细胞体系.实验结果表明转染拷贝教可以影响GDNF的分泌水平,相同条件下转染拷贝教越高,GDNF分泌量越多,其基因表达水平越高.因此,含GDNF的慢病毒载体可以成功转染人胚胎来源的神经干细胞,使其持续表达GDNE转染过程中可以通过拷贝数在一定水平上控制GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平.
이용함효질원성신경영양인자(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)기인적만병독재체전염료인배태래원적신경간세포,탐토료전염후GDNF재신경간세포중적체외표체수평급기영향인소.수선GDNF기인피극륭입만병독재체,통과순시전염법포장출병독상청,경적도감정후분별안고패수위1、2.5、5、10전염신경간세포.전염후세포경과조매소사선득도균일표체GDNF적신경간세포체계.기후분별이용매련면역흡부(ELISA)방법화Real-timePCR방법측정불동전염조세포재불동시간점GDNF적단백분비수평화기인표체수평.실험중구건료표체GDNF기인적만병독재체,포장출적병독상청재체외배양조건하성공전염료신경간세포,경조매소사선가이득도균일적지속표체분비GDNF적인배태피층신경간세포체계.실험결과표명전염고패교가이영향GDNF적분비수평,상동조건하전염고패교월고,GDNF분비량월다,기기인표체수평월고.인차,함GDNF적만병독재체가이성공전염인배태래원적신경간세포,사기지속표체GDNE전염과정중가이통과고패수재일정수평상공제GDNF적단백분비수평화기인표체수평.