中国病原生物学杂志
中國病原生物學雜誌
중국병원생물학잡지
JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
2008年
11期
801-804
,共4页
秦紫芳%邱云青%黄毕%高蕾%鲍朗
秦紫芳%邱雲青%黃畢%高蕾%鮑朗
진자방%구운청%황필%고뢰%포랑
分枝杆菌%结核%毒力分泌系统%Rv3871%蛋白表达
分枝桿菌%結覈%毒力分泌繫統%Rv3871%蛋白錶達
분지간균%결핵%독력분비계통%Rv3871%단백표체
目的 为探索参与结核分枝杆菌(MTB)毒力分泌系统相关基因的分子功能,对MTB H37Rv株编码Rv3871蛋白基因进行克隆、表达及鉴定分析.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,用PCR扩增Rv3871基因片段,并重组到原核表达载体pET32a(+)中,转化E. coli BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的 蛋白进行检测分析.结果 阳性重组质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切得到1 776和5 900 bp两条片段,与预期大小一致.重组质粒测序,与NCBI上Rv3871编码序列比对完全一致,且输入片段读码框与表达载体读码框相吻合.SDS-PAGE检测表达蛋白分子质量单位为84 ku;Western blot检测出特异性阳性信号.结论 本研究成功构建了结核杆菌毒力分泌系统重要相关基因Rv3871的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达Rv3871蛋白,为进一步探讨该基因在MTB毒力分泌中的功能奠定了基础.
目的 為探索參與結覈分枝桿菌(MTB)毒力分泌繫統相關基因的分子功能,對MTB H37Rv株編碼Rv3871蛋白基因進行剋隆、錶達及鑒定分析.方法 以結覈分枝桿菌H37Rv基因組為模闆,用PCR擴增Rv3871基因片段,併重組到原覈錶達載體pET32a(+)中,轉化E. coli BL21(DE3)菌株,用IPTG誘導蛋白錶達,通過SDS-PAGE和Western blot對目的 蛋白進行檢測分析.結果 暘性重組質粒經BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切得到1 776和5 900 bp兩條片段,與預期大小一緻.重組質粒測序,與NCBI上Rv3871編碼序列比對完全一緻,且輸入片段讀碼框與錶達載體讀碼框相吻閤.SDS-PAGE檢測錶達蛋白分子質量單位為84 ku;Western blot檢測齣特異性暘性信號.結論 本研究成功構建瞭結覈桿菌毒力分泌繫統重要相關基因Rv3871的原覈錶達質粒,併在大腸埃希菌中錶達Rv3871蛋白,為進一步探討該基因在MTB毒力分泌中的功能奠定瞭基礎.
목적 위탐색삼여결핵분지간균(MTB)독력분비계통상관기인적분자공능,대MTB H37Rv주편마Rv3871단백기인진행극륭、표체급감정분석.방법 이결핵분지간균H37Rv기인조위모판,용PCR확증Rv3871기인편단,병중조도원핵표체재체pET32a(+)중,전화E. coli BL21(DE3)균주,용IPTG유도단백표체,통과SDS-PAGE화Western blot대목적 단백진행검측분석.결과 양성중조질립경BamHⅠ화XhoⅠ쌍매절득도1 776화5 900 bp량조편단,여예기대소일치.중조질립측서,여NCBI상Rv3871편마서렬비대완전일치,차수입편단독마광여표체재체독마광상문합.SDS-PAGE검측표체단백분자질량단위위84 ku;Western blot검측출특이성양성신호.결론 본연구성공구건료결핵간균독력분비계통중요상관기인Rv3871적원핵표체질립,병재대장애희균중표체Rv3871단백,위진일보탐토해기인재MTB독력분비중적공능전정료기출.
