蚌埠医学院学报
蚌埠醫學院學報
방부의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE BENGBU
2008年
6期
640-643
,共4页
潘庆春%余永胜%汤正好%张韡%韩进超%臧国庆
潘慶春%餘永勝%湯正好%張韡%韓進超%臧國慶
반경춘%여영성%탕정호%장위%한진초%장국경
乙型肝炎核心抗原%Tat47-57%融合基因%重组融合蛋白质类%基因表达%大肠埃希菌
乙型肝炎覈心抗原%Tat47-57%融閤基因%重組融閤蛋白質類%基因錶達%大腸埃希菌
을형간염핵심항원%Tat47-57%융합기인%중조융합단백질류%기인표체%대장애희균
目的:探讨融合蛋白Tat47-57-HBcAg原核表达的可行性,并分析其表达形式,为研究其功能提供理论基础.方法:合成Tat47-57编码序列,PCR技术扩增HBcAg基因,通过重叠延伸PCR片段拼接法,将Tat47-57编码序列和HBcAg基因拼接,将融合基因克隆到pET28原核表达载体中.挑选测序正确的构建质粒转化大肠埃希菌Rosetta-gamiTM2(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导融合蛋白表达,表达产物超声破壁,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析融合蛋白的表达形式,Western印迹鉴定.结果:Tat47-57-HBcAg融合蛋白在大肠埃希菌中主要以可溶性形式过度表达,Western印迹分析表明Tat47-57-HBcAg融合蛋白可与HBcAg单克隆抗体反应.结论:融合蛋白Tat47-57-HBcAg以可溶性形式在原核表达系统中高效表达,并能特异性的被HBcAg单克隆抗体所识别.
目的:探討融閤蛋白Tat47-57-HBcAg原覈錶達的可行性,併分析其錶達形式,為研究其功能提供理論基礎.方法:閤成Tat47-57編碼序列,PCR技術擴增HBcAg基因,通過重疊延伸PCR片段拼接法,將Tat47-57編碼序列和HBcAg基因拼接,將融閤基因剋隆到pET28原覈錶達載體中.挑選測序正確的構建質粒轉化大腸埃希菌Rosetta-gamiTM2(DE3),異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導融閤蛋白錶達,錶達產物超聲破壁,十二烷基磺痠鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析融閤蛋白的錶達形式,Western印跡鑒定.結果:Tat47-57-HBcAg融閤蛋白在大腸埃希菌中主要以可溶性形式過度錶達,Western印跡分析錶明Tat47-57-HBcAg融閤蛋白可與HBcAg單剋隆抗體反應.結論:融閤蛋白Tat47-57-HBcAg以可溶性形式在原覈錶達繫統中高效錶達,併能特異性的被HBcAg單剋隆抗體所識彆.
목적:탐토융합단백Tat47-57-HBcAg원핵표체적가행성,병분석기표체형식,위연구기공능제공이론기출.방법:합성Tat47-57편마서렬,PCR기술확증HBcAg기인,통과중첩연신PCR편단병접법,장Tat47-57편마서렬화HBcAg기인병접,장융합기인극륭도pET28원핵표체재체중.도선측서정학적구건질립전화대장애희균Rosetta-gamiTM2(DE3),이병기-β-D-류대반유당감유도융합단백표체,표체산물초성파벽,십이완기광산납취병희선알응효전영(SDS-PAGE)분석융합단백적표체형식,Western인적감정.결과:Tat47-57-HBcAg융합단백재대장애희균중주요이가용성형식과도표체,Western인적분석표명Tat47-57-HBcAg융합단백가여HBcAg단극륭항체반응.결론:융합단백Tat47-57-HBcAg이가용성형식재원핵표체계통중고효표체,병능특이성적피HBcAg단극륭항체소식별.
