山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2008年
8期
742-746
,共5页
吉恺%WANG Xiao-ling%许爱辉%HU Zhi-min%苑辉卿
吉愷%WANG Xiao-ling%許愛輝%HU Zhi-min%苑輝卿
길개%WANG Xiao-ling%허애휘%HU Zhi-min%원휘경
前列腺特异抗原%蛋白转导结构域%增强型绿色荧光蛋白%前列腺肿瘤%细胞株
前列腺特異抗原%蛋白轉導結構域%增彊型綠色熒光蛋白%前列腺腫瘤%細胞株
전렬선특이항원%단백전도결구역%증강형록색형광단백%전렬선종류%세포주
目的 构建由前列腺特异抗原(PSA)启动子介导、表达带有蛋白转导结构域序列(TAT)的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白pPSA.TAT-EGFP表达载体,使TAT所携带的目的 蛋白能够在靶组织中高效表达,提高其特异性及表达效率.方法 以pEGFP-1载体为模板,设计包含TAT序列的引物,PCR技术扩增含有酶切位点的小片段SalI-TAT-EGFP-Not I,经胶回收纯化,连接到T克隆载体.双酶切及测序鉴定后,提取质粒、双酶切后胶回收得到目的 小片段.含有PSA启动子的pPSA-EGFP载体经Sal I和Not I双酶切后,胶回收含有PSA启动子序列的大片段.过夜连接目的 小片段与PSA启动子大片段,得到pPSA-TAT-EGFP表达载体.转化、筛选阳性克隆后酶切与测序鉴定.将构建载体分别转染前列腺癌细胞和大肠癌细胞检测其表达情况.结果 成功构建pPSA-TAT-EGFP表达载体.转染结果显示其能够在前列腺癌细胞中特异性表达.结论 引入了PSA组织特异性启动子的TAT所携带的目的 蛋白能够在前列腺癌组织中表达.
目的 構建由前列腺特異抗原(PSA)啟動子介導、錶達帶有蛋白轉導結構域序列(TAT)的增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)融閤蛋白pPSA.TAT-EGFP錶達載體,使TAT所攜帶的目的 蛋白能夠在靶組織中高效錶達,提高其特異性及錶達效率.方法 以pEGFP-1載體為模闆,設計包含TAT序列的引物,PCR技術擴增含有酶切位點的小片段SalI-TAT-EGFP-Not I,經膠迴收純化,連接到T剋隆載體.雙酶切及測序鑒定後,提取質粒、雙酶切後膠迴收得到目的 小片段.含有PSA啟動子的pPSA-EGFP載體經Sal I和Not I雙酶切後,膠迴收含有PSA啟動子序列的大片段.過夜連接目的 小片段與PSA啟動子大片段,得到pPSA-TAT-EGFP錶達載體.轉化、篩選暘性剋隆後酶切與測序鑒定.將構建載體分彆轉染前列腺癌細胞和大腸癌細胞檢測其錶達情況.結果 成功構建pPSA-TAT-EGFP錶達載體.轉染結果顯示其能夠在前列腺癌細胞中特異性錶達.結論 引入瞭PSA組織特異性啟動子的TAT所攜帶的目的 蛋白能夠在前列腺癌組織中錶達.
목적 구건유전렬선특이항원(PSA)계동자개도、표체대유단백전도결구역서렬(TAT)적증강형록색형광단백(EGFP)융합단백pPSA.TAT-EGFP표체재체,사TAT소휴대적목적 단백능구재파조직중고효표체,제고기특이성급표체효솔.방법 이pEGFP-1재체위모판,설계포함TAT서렬적인물,PCR기술확증함유매절위점적소편단SalI-TAT-EGFP-Not I,경효회수순화,련접도T극륭재체.쌍매절급측서감정후,제취질립、쌍매절후효회수득도목적 소편단.함유PSA계동자적pPSA-EGFP재체경Sal I화Not I쌍매절후,효회수함유PSA계동자서렬적대편단.과야련접목적 소편단여PSA계동자대편단,득도pPSA-TAT-EGFP표체재체.전화、사선양성극륭후매절여측서감정.장구건재체분별전염전렬선암세포화대장암세포검측기표체정황.결과 성공구건pPSA-TAT-EGFP표체재체.전염결과현시기능구재전렬선암세포중특이성표체.결론 인입료PSA조직특이성계동자적TAT소휴대적목적 단백능구재전렬선암조직중표체.
