吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2008年
1期
57-60
,共4页
舒振波%操海萍%王大民%张桂珍
舒振波%操海萍%王大民%張桂珍
서진파%조해평%왕대민%장계진
核心蛋白聚糖%基因表达%转染%CHO细胞
覈心蛋白聚糖%基因錶達%轉染%CHO細胞
핵심단백취당%기인표체%전염%CHO세포
目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础.方法:以含有人DCN cDNA的质粒pBluescript为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因片段.真核表达载体pcDNA3及PCR产物经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,转化大肠杆菌JM109,获得重组载体pCDNA-DEC,进行酶切鉴定和测序鉴定.脂质体lipofectamine介导重组载体转染CHO细胞,经G418(800 mg·L-1)筛选建立稳定转染细胞株.采用细胞免疫组织化学方法检测稳定转染CHO细胞中DCN表达.结果:PCR获得与预期大小一致约1 000 bp的特异性DNA片段;重组载体pCDNA-DEC经双酶切鉴定及测序证实,人DCN基因cDNA片段正确插入真核表达载体中;在稳定转染的CHO细胞株中可见DCN蛋白表达.结论:成功构建DCN真核表达载体pCDNA-DEC,并建立稳定转染CHO细胞株.
目的:構建人覈心蛋白聚糖(DCN)真覈錶達載體,併在CHO細胞中進行錶達,為進一步研究其抗腫瘤作用奠定基礎.方法:以含有人DCN cDNA的質粒pBluescript為模闆,採用聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增目的基因片段.真覈錶達載體pcDNA3及PCR產物經XbaⅠ和EcoRⅠ雙酶切後連接,轉化大腸桿菌JM109,穫得重組載體pCDNA-DEC,進行酶切鑒定和測序鑒定.脂質體lipofectamine介導重組載體轉染CHO細胞,經G418(800 mg·L-1)篩選建立穩定轉染細胞株.採用細胞免疫組織化學方法檢測穩定轉染CHO細胞中DCN錶達.結果:PCR穫得與預期大小一緻約1 000 bp的特異性DNA片段;重組載體pCDNA-DEC經雙酶切鑒定及測序證實,人DCN基因cDNA片段正確插入真覈錶達載體中;在穩定轉染的CHO細胞株中可見DCN蛋白錶達.結論:成功構建DCN真覈錶達載體pCDNA-DEC,併建立穩定轉染CHO細胞株.
목적:구건인핵심단백취당(DCN)진핵표체재체,병재CHO세포중진행표체,위진일보연구기항종류작용전정기출.방법:이함유인DCN cDNA적질립pBluescript위모판,채용취합매련식반응(PCR)확증목적기인편단.진핵표체재체pcDNA3급PCR산물경XbaⅠ화EcoRⅠ쌍매절후련접,전화대장간균JM109,획득중조재체pCDNA-DEC,진행매절감정화측서감정.지질체lipofectamine개도중조재체전염CHO세포,경G418(800 mg·L-1)사선건립은정전염세포주.채용세포면역조직화학방법검측은정전염CHO세포중DCN표체.결과:PCR획득여예기대소일치약1 000 bp적특이성DNA편단;중조재체pCDNA-DEC경쌍매절감정급측서증실,인DCN기인cDNA편단정학삽입진핵표체재체중;재은정전염적CHO세포주중가견DCN단백표체.결론:성공구건DCN진핵표체재체pCDNA-DEC,병건립은정전염CHO세포주.
