中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
346-350
,共5页
李保卫%胡云峰%王丽非%崔智慧%洪斌%邵荣光
李保衛%鬍雲峰%王麗非%崔智慧%洪斌%邵榮光
리보위%호운봉%왕려비%최지혜%홍빈%소영광
重组融合蛋白质类%抗体%链霉菌属%力达霉素
重組融閤蛋白質類%抗體%鏈黴菌屬%力達黴素
중조융합단백질류%항체%련매균속%력체매소
目的 构建可表达力达霉素(LDM)辅基蛋白基因与抗Ⅳ型胶原酶单链抗体(scFv)融合蛋白的重组菌株,获得既具有靶向性、又具有抗肿瘤活性的scFV-LDM.方法 以大肠埃希菌-链霉菌穿梭质粒pBS03 为基础构建同源双交换质粒pBS-scFv,利用接合转移将该质粒转入球孢链霉菌(S. Globisporus)C-1027,根据抗性差异筛选获得重组菌株.用PCR、DNA 印迹法对重组菌株进行验证.用SDS-PAGE 检测重组菌株中目的融合蛋白的表达.用抑菌圈试验检测重组菌株发酵液的抑菌活性.结果 经同源重组得到重组菌株S. Globisporus C-1027-scFv.PCR 显示重组菌株扩增产物与预期一致,DNA 印迹分析显示重组菌株得到与预期吻合的杂交片段,表明scFv-LDM 融合蛋白基因已经成功取代LDM 辅基蛋白基因.SDS-PAGE 结果显示重组菌株不再产生辅基蛋白.抑菌圈试验显示重组菌株发酵液在第5 天能够检测到抑菌活性.初步结果表明,重组菌株可产生scFv-LDM 融合蛋白.结论 成功构建了可产生scFv-LDM 融合蛋白且具有分泌活性的重组菌株.这对改造和研发新型单抗导向药物有实际意义.
目的 構建可錶達力達黴素(LDM)輔基蛋白基因與抗Ⅳ型膠原酶單鏈抗體(scFv)融閤蛋白的重組菌株,穫得既具有靶嚮性、又具有抗腫瘤活性的scFV-LDM.方法 以大腸埃希菌-鏈黴菌穿梭質粒pBS03 為基礎構建同源雙交換質粒pBS-scFv,利用接閤轉移將該質粒轉入毬孢鏈黴菌(S. Globisporus)C-1027,根據抗性差異篩選穫得重組菌株.用PCR、DNA 印跡法對重組菌株進行驗證.用SDS-PAGE 檢測重組菌株中目的融閤蛋白的錶達.用抑菌圈試驗檢測重組菌株髮酵液的抑菌活性.結果 經同源重組得到重組菌株S. Globisporus C-1027-scFv.PCR 顯示重組菌株擴增產物與預期一緻,DNA 印跡分析顯示重組菌株得到與預期吻閤的雜交片段,錶明scFv-LDM 融閤蛋白基因已經成功取代LDM 輔基蛋白基因.SDS-PAGE 結果顯示重組菌株不再產生輔基蛋白.抑菌圈試驗顯示重組菌株髮酵液在第5 天能夠檢測到抑菌活性.初步結果錶明,重組菌株可產生scFv-LDM 融閤蛋白.結論 成功構建瞭可產生scFv-LDM 融閤蛋白且具有分泌活性的重組菌株.這對改造和研髮新型單抗導嚮藥物有實際意義.
목적 구건가표체력체매소(LDM)보기단백기인여항Ⅳ형효원매단련항체(scFv)융합단백적중조균주,획득기구유파향성、우구유항종류활성적scFV-LDM.방법 이대장애희균-련매균천사질립pBS03 위기출구건동원쌍교환질립pBS-scFv,이용접합전이장해질립전입구포련매균(S. Globisporus)C-1027,근거항성차이사선획득중조균주.용PCR、DNA 인적법대중조균주진행험증.용SDS-PAGE 검측중조균주중목적융합단백적표체.용억균권시험검측중조균주발효액적억균활성.결과 경동원중조득도중조균주S. Globisporus C-1027-scFv.PCR 현시중조균주확증산물여예기일치,DNA 인적분석현시중조균주득도여예기문합적잡교편단,표명scFv-LDM 융합단백기인이경성공취대LDM 보기단백기인.SDS-PAGE 결과현시중조균주불재산생보기단백.억균권시험현시중조균주발효액재제5 천능구검측도억균활성.초보결과표명,중조균주가산생scFv-LDM 융합단백.결론 성공구건료가산생scFv-LDM 융합단백차구유분비활성적중조균주.저대개조화연발신형단항도향약물유실제의의.
