第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2007年
22期
2148-2151
,共4页
黄渝侃%张明昌%王勇%张进祥%范可顺%张光红
黃渝侃%張明昌%王勇%張進祥%範可順%張光紅
황투간%장명창%왕용%장진상%범가순%장광홍
RNA干扰%p27Kip1%质粒
RNA榦擾%p27Kip1%質粒
RNA간우%p27Kip1%질립
目的 构建细胞周期性激酶抑制剂p27Kip1的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对牛角膜内皮细胞增殖能力的影响.方法 设计有发夹状结构的3条p27Kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照.转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGenSil-1质粒,构建重组质粒pGenSil-1/p27Kip1-1、pGenSil-1/p27Kip1-2、pGenSil-1/p27Kip1-3、pGenSil-1/HK.转化DH5α菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定.以脂质体法将4个重组质粒分别导入牛角膜内皮细胞.转染后48 h以Western blot法检测p27Kip1蛋白水平及MTT法检测各实验组和对照组细胞增殖情况.结果 酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功.3个实验组p27Kip1蛋白水平分别下降了66.41%、61.51%、71.32%,shRNA可显著促进牛角膜内皮细胞增殖.结论 成功构建了针对p27Kip1的RNA干扰表达载体.
目的 構建細胞週期性激酶抑製劑p27Kip1的小髮夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)錶達質粒,併觀察其對牛角膜內皮細胞增殖能力的影響.方法 設計有髮夾狀結構的3條p27Kip1-shRNA對應模闆DNA序列,併構建無關序列HK-shRNA作為陰性對照.轉入帶有增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)和啟動子U6的pGenSil-1質粒,構建重組質粒pGenSil-1/p27Kip1-1、pGenSil-1/p27Kip1-2、pGenSil-1/p27Kip1-3、pGenSil-1/HK.轉化DH5α菌株,提取質粒行酶切及測序鑒定.以脂質體法將4箇重組質粒分彆導入牛角膜內皮細胞.轉染後48 h以Western blot法檢測p27Kip1蛋白水平及MTT法檢測各實驗組和對照組細胞增殖情況.結果 酶切及測序證實4箇重組質粒均構建成功.3箇實驗組p27Kip1蛋白水平分彆下降瞭66.41%、61.51%、71.32%,shRNA可顯著促進牛角膜內皮細胞增殖.結論 成功構建瞭針對p27Kip1的RNA榦擾錶達載體.
목적 구건세포주기성격매억제제p27Kip1적소발협RNA(short hairpin RNA,shRNA)표체질립,병관찰기대우각막내피세포증식능력적영향.방법 설계유발협상결구적3조p27Kip1-shRNA대응모판DNA서렬,병구건무관서렬HK-shRNA작위음성대조.전입대유증강형록색형광단백(EGFP)화계동자U6적pGenSil-1질립,구건중조질립pGenSil-1/p27Kip1-1、pGenSil-1/p27Kip1-2、pGenSil-1/p27Kip1-3、pGenSil-1/HK.전화DH5α균주,제취질립행매절급측서감정.이지질체법장4개중조질립분별도입우각막내피세포.전염후48 h이Western blot법검측p27Kip1단백수평급MTT법검측각실험조화대조조세포증식정황.결과 매절급측서증실4개중조질립균구건성공.3개실험조p27Kip1단백수평분별하강료66.41%、61.51%、71.32%,shRNA가현저촉진우각막내피세포증식.결론 성공구건료침대p27Kip1적RNA간우표체재체.
