四川生理科学杂志
四川生理科學雜誌
사천생이과학잡지
SICHUAN JOURNAL OF PHYSIOLOGICAL SCIENCES
2007年
2期
49-52
,共4页
高梅%刘延友%汪宇辉%赵京卉%叶珊%肖静%王正荣
高梅%劉延友%汪宇輝%趙京卉%葉珊%肖靜%王正榮
고매%류연우%왕우휘%조경훼%협산%초정%왕정영
hClock%Bax%原核表达%纯化
hClock%Bax%原覈錶達%純化
hClock%Bax%원핵표체%순화
目的:构建hClock-(35-47)_Bax-(55-77)的表达质粒,进行诱导表达,纯化和鉴定.方法:合成hClock-(35-47)_Bax-(55-77)全长DNA序列,重组入pET-32a表达载体中,测序鉴定后转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,构建好重组体的表达菌株.IPTG诱导并优化表达后,以NTA-Ni亲合层析进行分离纯化,及SDS-PAGE和Western blotting鉴定.结果:成功构建了hClock-(35-47)_Bax-(55-77)的表达载体,插入片断为128bp,表达产物相对分子质量约为23kD,经Western blotting鉴定,与抗His-Tag抗体有特异性反应.结论:hClock-(35-47)_Bax-(55-77)融合蛋白可以用原核表达的方法大量获得,并通过亲和层析纯化达到较好的纯度,为下一步的研究提供基础.
目的:構建hClock-(35-47)_Bax-(55-77)的錶達質粒,進行誘導錶達,純化和鑒定.方法:閤成hClock-(35-47)_Bax-(55-77)全長DNA序列,重組入pET-32a錶達載體中,測序鑒定後轉化入大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株,構建好重組體的錶達菌株.IPTG誘導併優化錶達後,以NTA-Ni親閤層析進行分離純化,及SDS-PAGE和Western blotting鑒定.結果:成功構建瞭hClock-(35-47)_Bax-(55-77)的錶達載體,插入片斷為128bp,錶達產物相對分子質量約為23kD,經Western blotting鑒定,與抗His-Tag抗體有特異性反應.結論:hClock-(35-47)_Bax-(55-77)融閤蛋白可以用原覈錶達的方法大量穫得,併通過親和層析純化達到較好的純度,為下一步的研究提供基礎.
목적:구건hClock-(35-47)_Bax-(55-77)적표체질립,진행유도표체,순화화감정.방법:합성hClock-(35-47)_Bax-(55-77)전장DNA서렬,중조입pET-32a표체재체중,측서감정후전화입대장간균Rosetta(DE3)균주,구건호중조체적표체균주.IPTG유도병우화표체후,이NTA-Ni친합층석진행분리순화,급SDS-PAGE화Western blotting감정.결과:성공구건료hClock-(35-47)_Bax-(55-77)적표체재체,삽입편단위128bp,표체산물상대분자질량약위23kD,경Western blotting감정,여항His-Tag항체유특이성반응.결론:hClock-(35-47)_Bax-(55-77)융합단백가이용원핵표체적방법대량획득,병통과친화층석순화체도교호적순도,위하일보적연구제공기출.
